II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.Phổ các peptid từ độc tố ốc cố
Để đánh giá mức độ đa dạng của các peptid trong độc tố thơ, mẫu được lọc để thu các peptid cĩ khối lượng phân tử nhỏ hơn 10.000 dalton vì đây là 0,14g so với lồi C.textile, 0,26g. Khối lượng vịi hút tuy vậy lại khá giống nhau từ 0,19 - 0,21g.
Hình 2. Khối lượng các bộ phận của tuyến độc ở 3 lồi ốc cối C.textile, C. striatus và C.vexillum
Hình 1. Cấu tạo tuyến nọc độc của Conus textile
Túi răng kitin (Dr), ống dẫn (Od), túi nọc độc (Td), vịi hút (Vh)
Bảng 1. Khối lượng trung bình tuyến nọc độc của 3 lồi ốc cối, số cá thể mỗi lồi n=10
Lồi Túi độc (g) Ống dẫn (g) Túi răng kitin (g) Vịi hút (g) KL tuyến độc một cá thể (g)
Conus textile 0,46 ± 0,11 0,26 ± 0,08 0,07 ± 0,05 0,21 ± 0,04 1,00 ± 0,22
Conus striatus 2,87 ± 0,27 0,14 ± 0,02 0,04 ± 0,01 0,21 ± 0,10 3,25 ± 0,36
a
b
c
Hình 3. Phổ sắc ký đồ của Conus textile ở thời gian chạy gradient khác nhau, a:60, b:90 và c:120 phút
nhĩm cĩ tính chất sinh học đáng chú ý nhất. Để tìm chế độ chạy gradien tốt nhất, thời gian được thử là 60, 90 và 120 phút. Kết quả cho trên hình 3 cho thấy chế độ chạy gradien ở 120 phút cho sự phân tách
các peak khá rõ. Do đĩ chế độ này được chọn để chạy độc tố cho cả ba lồi. Đây là thí nghiệm ban đầu do đĩ chỉ cho thơng tin về số lượng và vị trí các peak mà chưa định danh chính xác.
Conus striatus
Conus textile
Conus vexillum
Hình 4. Phổ sắc ký đồ của ba lồi ốc cối C. striatus, C. textile và C.vexillum
Dựa trên phổ sắc ký của 3 lồi ốc, cĩ thể nhận thấy mặc dù đã lọc tách phần protein cĩ khối lượng phân tử cao trên 10.000 Da, phần cịn lại cĩ thành phần khá phức tạp. Số lượng các peak rất nhiều và ở các thời gian lưu khác nhau, cường độ hấp thụ UV khác nhau và diện tích khác nhau cho thấy loại, số lượng các loại peptid trong chất độc của từng lồi ốc rất phong phú và đa dạng. Sơ bộ cĩ thể nhận thấy số lượng peptid trong các mẫu độc tố từ trên 50 cho đến 100 loại khác nhau. Điều này phù hợp với các tác giả nước ngồi. Để cĩ thể xác định các loại peptid trong phổ cần nghiên cứu sâu hơn. Cả 3 lồi đều cĩ các peak xuất hiện rõ và khá cao tại các thời gian lưu là 37 và 72 phút.
Để định danh các loại conotoxin trong dịch độc tố này, cần tiến hành phân tích khối phổ và giải trình tự protein, sau đĩ thử nghiệm lại độc tính bằng các thử nghiệm sinh học khác. Trong khuơn khổ đề tài về bảo tồn nguồn lợi gen, các nghiên cứu ở đây mới chỉ dừng lại ở các kết quả bước đầu phân tích và đánh giá nguồn gen.
IV. KẾT LUẬN
Kết quả cho thấy cấu tạo tuyến độc tố của ba lồi ốc cối thu được rất đặc trưng của họ ốc cối và sơ bộ cho thấy số lượng các peptid trong độc tố của từng lồi rất phong phú. Các độc tố này sẽ là nguồn cung cấp các peptid đa dạng cho các nghiên cứu về sinh học thần kinh tại nước ta.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Heinrich Terlau and Baldomero M.Olivera (2004). Conus Venoms: A rich source of Novel Ion Channel-Targeted Peptides.
Physiological Reviews, 84:41-68.
2. Hylleberg, J and Kilburm, R.N. (2003). Marine molluscs of Vietnam,Proceeding of 16th International Congress and Workshop, Tropical Marine Molluscs Program (TMMP).
3. Jennifer Marshall, Wayne P.Kelly, Stanislav S. Rubakhin, Jon-Paul Bingham, Jonathan V. Sweedler, and William F. Gilly (2002). Anatomical Correlates of Venom Production in Conus californicus. Biological bulletin 203:27-41.
4. Jon-Paul Bingham, Erin Mitsunaga, Zachary L. Bergeron (2010) Drugs from slugs-Past, present and future perspectives of ω-conotoxin research. Chemico-Biological Interactions, 183: 1-18.
5. Richard J. Lewis (2009) Conotoxins: Molecular and Therapeutic in:Targets. N.Fusetami and W.Kem (eds), Marine Toxins as Research tools, Progress in Molecular and Subcellular Biology, Marine Molecular Biotechnology 46. Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Germany.