Chuẩn bị húa chất

Một phần của tài liệu Công nghệ protein enzyem (Trang 66 - 67)

- O CH2 COOH phõn ly

4. XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN

4.3.2. Chuẩn bị húa chất

- Dung dịch A : được pha bằng cách trụ̣n lõ̃n các dung dịch A 1, A2, A3 theo tỉ lợ̀ lõ̀n lượt là 100:1:1

+ Dung dịch A1 : Na2CO3pha trong nước cṍt theo tỉ lợ̀ 2% (w/v) + Dung dịch A2 : CuSO4.5H2O pha trong nước cṍt theo tỉ lợ̀ 1% (w/v)

+ Dung dịch A 3 : K-Na tartrate (muụ́i Seignet ) pha trong nước cṍt theo tỉ lợ̀ 2% (w/v)

- Dung dịch NaOH 2N

- Thuụ́c thử Folin (dạng thương mại): sử dụng ở nụ̀ng đụ̣ 1N

- Dung dịch pro tein chuõ̉n: sử dụng protein tinh thờ̉ (thường dùng là Albumin huyờ́t thanh bò ) pha với nước cṍt đờ̉ tạo thành dung dịch protein chuõ̉n có nụ̀ng đụ̣ 2 mg/ml (khi chưa dùng đờ́n thì dung dịch này cõ̀n được bảo quản ở nhiợ̀t đụ̣ -200

C), từ nụ̀ng đụ̣ protein chuõ̉n này lõ̀n lượt pha thành dãy dung dịch protein với các nụ̀ng đụ̣ khác nhau thay đụ̉i từ 0àg/ml đờ́n 1000àg/ml theo bảng sau:

Bảng 3.2. Chuẩn bị dung dịch protein chuẩn

Protein chuõ̉n 2mg/ml (àl) 0 2,5 5 12,5 25 50 125 250 Nước cṍt (àl) 500 497,5 495 487,5 475 450 375 250 Hàm lượng protein (àg/ml) 0 10 20 50 100 200 500 1000 4.3.3. Tiến hành thớ nghiệm

- Cho vào ụ́ng nghiợ̀m 0,1 ml dung dịch mõ̃u cõ̀n xác định hàm lượng protein , sau đó thờm vào 0,1 ml dung dịch NaOH 2N. Đặt ụ́ng nghiợ̀m ở 1000C trong bụ̀n ụ̉n nhiợ̀t hoặc trờn bờ́p đun sụi cách thủy trong 10 phỳt.

- Đờ̉ nguụ̣i, thờm vào 1 ml dung dịch A , lắc đờ̀u, đặt ở nhiợ̀t đụ̣ phòng trong 10 phỳt.

- Thờm vào 0,1 ml thuụ́c thử Fol in, đờ̉ trờn máy lắc , lắc đờ̀u trong thời gian từ 30ữ 60 phỳt (khụng nờn đờ̉ quá 60 phỳt)

- Sau thời gian trờn, xác định cường đụ̣ màu dung dịch ở bước sóng 750 nm nờ́u hàm lượng protein mõ̃u dưới 500 mg/ml hoặc so màu ở bước sóng 550 nm nờ́u hàm lượng protein trong khoảng 100 ữ 2000 mg/ml.

- Tiờ́n hành các bước tương tự như trờn với dung dịch protein chuõ̉n ở các nụ̀ng đụ̣ đã được pha như bảng trờn , từ đó xõy dựng được phương trình hụ̀i qui hoặc đường chuõ̉n biờ̉u diờ̃n sự tương quan giữa cường đụ̣ màu và hàm lượng protein.

- Dựa vào đường chuõ̉n và từ cường đụ̣ màu đo được của dung dịch mõ̃u xác định được hàm lượng protein của mõ̃u.

Một phần của tài liệu Công nghệ protein enzyem (Trang 66 - 67)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(150 trang)