Một số lưu ý khi sử dụng phương phỏp Lowry

- O CH2 COOH phõn ly

4.3.4.Một số lưu ý khi sử dụng phương phỏp Lowry

4. XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN

4.3.4.Một số lưu ý khi sử dụng phương phỏp Lowry

- Nờ́u trong mõ̃u có tạo thành kờ́t tủa , cõ̀n thờm vào NaOH 2N và đặt ở bờ̉ ụ̉n nhiợ̀t trong thời gian lõu hơn cho đờ́n khi kờ́t tủa tan hoàn toàn . Ở bước này thời gian khụng ảnh hưởng kờ́t quả thí nghiợ̀m cuụ́i cùng.

- pH của dung d ịch có ảnh hưởng rṍt lớn đờ́n kờ́t quả thí nghiợ̀m , do đó cõ̀n giữ pH trong khoảng 10 ữ 10,5.

- Với những mõ̃u có hàm lượng protein cao , cõ̀n pha loãng mõ̃u sao cho hàm lượng protein giới hạn trong khoảng từ 0,001 đờ́n 1 mg/ml do ở hàm lượng protein cao giá trị mọ̃t đụ̣ quang sẽ khụng còn tuyờ́n tính với hàm lượng protein nờn sẽ dõ̃n đờ́n kờ́t quả sai khi đụ́i chiờ́u với đường chuõ̉n.

- Sự bṍt tiợ̀n của phương pháp Lowry đó là do mụ̣t sụ́ chṍt có khả năng gõy cản trở đờ́n các phản ứng tạo màu của protein như acid nucleic , các phõn tử đường hoặc các hợp chṍt có vòng thơm . Do đó đờ̉ có được kờ́t quả chính xác hơn , cõ̀n phải loại bỏ những hợp chṍt này ra khỏi dung dịch protein.

- Cường đụ̣ màu của phản ứng phụ thuụ̣c vào thành phõ̀n acid amin tham gia vào cṍu tạo của protein , do đó nờ́u hai loại protein khác nhau nhưng có cùng nụ̀ng đụ̣ có thờ̉ dõ̃n đờ́n giá trị mọ̃t đụ̣ quang khác nhau . Trong phương pháp này , protein sử dụng làm chṍt chuõ̉n là Albumin huyờ́t thanh bò , nờn cũng sẽ dõ̃n đờ́n sai sụ́ nhṍt định khi protein cõ̀n nghiờn cứu khụng có sự tương đụ̀ng vờ̀ thành phõ̀n acid amin . Do đó tụ́t nhṍt nờn sử dụng protein làm dung dịch chuõ̉n cùng loại với protein cõ̀n nghiờn cứu.