Nguyờn tắc chung xác định hàm lượng protein

- O CH2 COOH phõn ly

4. XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN

4.1. Nguyờn tắc chung xác định hàm lượng protein

Bờn cạnh hoạt đụ̣ enzyme, hàm lượng protein là mụ̣t trong yờ́u tụ́ quan trọng đờ̉ đánh giá chṍt lượng của enzyme. Trong quỏ trình tách chiờ́t , đờ̉ thu nhọ̃n chờ́ phõ̉m enzyme bằng các phương pháp kờ́t tủa khác nhau , sản phõ̉m thu được thường có lõ̃n các thành phõ̀n khác khụng phải protein – enzyme, do đó viợ̀c xác định hàm lượng protein là nhằm đánh giá tỉ lợ̀ trọng lượng protein có trong chờ́ phõ̉m enzyme thụ thu nhọ̃n từ mõ̃u so với trọng lượng của chờ́ phõ̉m enzyme thụ là lớn hay bộ đờ̉ từ đó xác định được mức đụ̣ tạp nhiờ̃m của các thành phõ̀n khác khụng có bản chṍt protein cú trong chờ́ phõ̉m enzyme thu được. Ngoài ra xác định được hàm lượng protein còn là cơ sở đờ̉ xác định được hoạt đụ̣ riờng của enzyme, đõy là mụ̣t giá trị quan trọng đờ̉ bước đõ̀u đánh giá vờ̀ mức đụ̣ tinh sạch của enzyme cũng như đánh giá khả năng xúc tác của enzyme.

Với các sản phõ̉m có bản chṍt là protein nhưng khụng phải là enzyme, viợ̀c xác định được hàm lượng protein nhằm đánh giá bước đõ̀u vờ̀ giá trị protein cõ̀n thu nhọ̃n

là lớn hay bộ đờ̉ từ đó người ta có thờ̉ làm cơ sở đờ̉ chọn lựa phương pháp cũng như nguụ̀n nguyờn liợ̀u phù hợp, sao cho khụ́i lượng protein thu được là cao nhṍt.

Có nhiờ̀u phương pháp khác nhau đờ̉ xác định hàm lượng protein , các phương pháp đó chủ yờ́u dựa vào các đặc tính vọ̃t lý và hóa học của phõn tử protein cũng như của các acid amin tham gia cṍu tạo nờn phõn tử protein đó . Tùy đặc điờ̉m cṍu tạo của protein - enzyme, tùy mục đích nghiờn cứu mà người ta chọn lựa p hương pháp xác định hàm lượng protein phù hợp . Mụ̃i phương pháp được sử dụng đờ̉ xác định hàm lượng protein đờ̀u có những sai sụ́ nhṍt định, sai sụ́ này xảy ra do các yờ́u tụ́ sau :

- Sai sụ́ do dụng cụ thí nghiợ̀m

- Sai sụ́ do các trang thiờ́t bị đo lường như các thiờ́t bị cõn , đo, máy đo quang phụ̉

- Sai sụ́ do trong mõ̃u thí nghiợ̀m võ̃n còn lõ̃n mụ̣t sụ́ chṍt có bản chṍt hóa học tương tự như protein cõ̀n nghiờn cứu hoặc các chṍt này có khả năng tham g ia vào cỏc phản ứng mà gõy ảnh hưởng trực tiờ́p đờ́n kờ́t quả thí nghiợ̀m . Ví dụ như trong các phản ứng tạo màu của protein , nờ́u trong mõ̃u võ̃n tụ̀n tại mụ̣t sụ́ chṍt như acid nucleic hay glucid, các chṍt này trong mụ̣t sụ́ trường hợp có khả năng phản ứng tương tự như protein làm cho màu sắc của phản ứng tăng lờn (hoặc giảm xuụ́ng) hoặc các chṍt này có khả năng tham gia vào các phản ứng mà biờ́n đụ̉i cṍu tạo của các chṍt trực tiờ́p tạo phản ứng màu với protein.