Phương phỏp xỏc định hoạt độ enzyme glucoamylase

- O CH2 COOH phõn ly

5. XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ENZYME 1 Nguyờn tắc chung

5.3.3. Phương phỏp xỏc định hoạt độ enzyme glucoamylase

a. Nguyờn tắc

Hoạt đụ̣ glucoamylase được tính dựa trờn lượng gluco tạo ra khi thủy phõn tinh bụ̣t bằng enzyme. Hàm lượng gluco được xác định bằng cách đo mọ̃t đụ̣ qua ng của dung dịch khi có mặt thuụ́c thử DNS (3,5 dinitro Salicilic acid) tại bước sóng 520 nm. Mụ̣t đơn vị hoạt đụ̣ glucoseamylase xúc tác thủy phõn tinh bụ̣t giải phóng mụ̣t àmol gluco trong mụ̣t phút, ở điờ̀u kiợ̀n xác định.

b. Húa chất

Hụ̀ tinh bụ̣t 2%, dung dịch đợ̀m acetate 0,15 M, pH 5, thuụ́c thử DNS (hũa tan 0,5 g DNS trong 100 ml NaOH 2N và 150g muụ́i kộp Na-K Tartrate ở nhiợ̀t đụ̣ phòng, sau đó thờm nước cṍt cho đờ́n 500 ml)

c. Tiến hành

Chuõ̉n bị các ụ́ng chứa 3ml DNS. Cho 1ml enzyme đã pha loãng ở mức đụ̣ thích hợp vào ụ́ng chứa 2ml hụ̀ tinh bụ̣t và 2ml đợ̀m acetate. Cho 1ml hụ̃n hợp phản ứng vào ụ́ng chứa 3ml DNS đờ̉ xác định lượng đường khử tại thời điờ̉m 0 trước khi ủ ở nhiợ̀t đụ̣ thí nghiợ̀m trong 10 phỳt. Cho 1ml dịch mõ̃u sau khi đã ủ 10 phút vào các ụ́ng chứa 3ml DNS. Các ụ́ng được đun cách thủy 10 phỳt, sau đó làm nguụ̣i . Xác định mọ̃t đụ̣ quang tại bước sóng 520 nm, sử dụng ụ́ng đụ́i chứng là dung dịch 3ml DNS và mụ̣t ml nước cṍt.

Tính lượng đường khử tạo ra dựa trờn đường chuõ̉n Gluco với hàm lượng từ 100-500 ug/ml

d. Cỏch tớnh hoạt độ enzyme glucoamylase

Hoạt đụ̣ enzyme glucoamylase được biờ̉u hiợ̀n bằng lượng gluco giải phóng bởi enzyme tác dụng trong thời gian 1 phỳt, ở điờ̀u kiợ̀n xác định.

- m: khụ́i lượng CPE (g)