C hỉnh pH 5,5 ụ đặc dịch
3.2.2. Thu nhận pepsin
Quá trình chiờ́t tách pepsin từ màng nhõ̀y dạ dày là sự phụ́i hợp của 3 quá trình: phá vỡ tờ́ bào, hoạt hóa và chiờ́t tách enzyme. Hiợ̀n nay có 2 phương pháp thu nhọ̃n pepsin là phương pháp chiờ́t và phương pháp tự phõn. Nguyờn liợ̀u thường dùng là dạ dày heo thu nhọ̃n từ các lò giờ́t mụ̉. Đờ̉ có được chờ́ phõ̉m enzyme tụ́t nguyờn liợ̀u phải tươi, lṍy ngay sau khi giờ́t mụ̉.
1- Phương pháp chiờ́t
Phương pháp chiờ́t được thực hiợ̀n theo qui trình sau:
Dạ dày Rửa sạch Tách màng nhõ̀y Nghiờ̀n Chiờ́t tách Kờ́t tủa Ly tõm Chờ́ phõ̉m thụ
Đờ̉ chiờ́t tách người ta ngõm vào nước có 5% butanol hay glyxerin và chloroform đờ̉ tránh nhiờ́m khuõ̉n.
Đờ̉ kờ́t tủa có thờ̉ sử dụng ethanol hoặc muụ́i sulphat amon hoặc dung mụi hữu cơ.
2- Phương pháp tự phõn
Qui trỡnh thu nhọ̃n được thực hiờn theo sơ đụ̀ sau (của Payeba và cụ̣ng sự):
Dạ dày Rửa sạch Tách màng nhõ̀y Xay nhuyờ̃n Tự phõn Lọc Kờ́t tủa Ly tõm Sṍy Chờ́ phõ̉m thụ.
Giai đoạn tự phõn: màng nhõ̀y sau khi xay nhuyờ̃n bụ̉ sung thờm HCl 0,5% với tỉ lợ̀ dạ dày/dịch là 1/2 theo khụ́i lượng. Khuṍy đờ̀u trong thời gian 24 -28 giờ, sau đó lọc vớt bỏ mỡ nhiờ̀u lõ̀n và thu dịch lọc.
- Kờ́t tủa: Kờ́t tủa bằng NaCl nụ̀ng đụ̣ bảo hòa 25% bằng cách cho muụ́i từ từ, khuṍy nhẹ cho đờ́n khi dung dịch bảo hòa. Đờ̉ yờn trong 30 phút. Đờ̉ có thờ̉ kờ́t tủa có thờ̉ dùng các tác nhõn khác như cụ̀n, muụ́i amon sulphat, axeton, izopropanol ...
- Ly tõm: Hụ̃n hợp dịch sau đờ̉ yờn được ly tõm 10 -15 phỳt với tụ́c đụ̣ 5000 - 6000 vũng / phỳt.
- Sau khi ly tõm sṍy kờ́t tủa ở 30 -40oC hoặc sṍy đụng khụ. Đờ̉ tránh bị mṍt hoạt tớnh, trong quá trình sṍy người ta trụ̣n thờm vào chờ́ phõ̉m enzyme chṍt đụ̣n như tinh bụ̣t hòa tan, maltose, dextrin....