E S↔ S P Trong đó:
2.7. Hoạt độ của enzyme
Hoạt đụ̣ của enzyme được xác định thụng qua viợ̀c xác định vọ̃n tụ́c phản ứng enzyme. Đờ̉ đánh giá vọ̃n tụ́c của mụ̣t phản ứng enzyme, người ta thường đánh giá khả năng làm giảm cơ chṍt sau mụ̣t đơn vị thời gian hay đánh giá lượng sản phõ̉m tạo thành sau mụ̣t đơn vị thời gian.
Có thờ̉ sử dụng mụ̣t trong ba nhóm phương pháp thờ̉ hiợ̀n tại Bảng 1.3 đờ̉ đánh giá khả năng xúc tác của enzyme.
Bảng 1.3. Ba nhúm phương phỏp xỏc định khả năng xỳc tỏc của enzyme
Nhúm P.P Thụng số cố định Thụng số thay đổi
1 - Thời gian
- Nụ̀ng đụ̣ enzyme
- Cơ chṍt
- Sản phõ̉m tạo thành 2 - Lượng cơ chṍt mṍt đi hay lượng sản phõ̉m
tạo thành
- Nụ̀ng đụ̣ enzyme
- Thời gian
3 - Lượng cơ chṍt mṍt đi hay lượng sản phõ̉m tạo thành
- Thời gian
- Nụ̀ng đụ̣ enzyme
Ví dụ ở nhóm phương pháp 1 có thờ̉ thực hiợ̀n như sau: Thực hiợ̀n phản ứng với sự có mặt của mụ̣t lượng cơ chṍt dư và lượng enzyme cụ́ định, làm dừng phản ứng sau mụ̣t khoảng thời gian nhṍt định và đo lượng cơ chṍt bị mṍt đi hoặc lượng sản phõ̉m tạo thành, từ đó tính ra sụ́ đơn vị enzyme.
Tương tự như vọ̃y, có thờ̉ thực hiợ̀n phương pháp 2 và 3 với các thụng sụ́ cụ́ định và đo các thụng sụ́ thay đụ̉i. Vọ̃n tụ́c của phản ứng enzyme do nhiờ̀u nguyờn nhõn thường giảm theo thời gian, vì vọ̃y tụ́t nhṍt là nờn xác định vọ̃n tụ́c phản ứng ngay ở những phút đõ̀u, khi phản ứng còn là phản ứng bọ̃c "0".
Đụ̣ hoạt đụ̣ng của enzyme được xác định thụng qua đơn vị hoạt đụ̣. Có các loại đơn vị hoạt đụ̣ sau:
- Đơn vị quốc tế (UI): Là lượng enzyme có khả năng xúc tác làm chuyờ̉n hoá được 1 micrụmol (1àmol) cơ chṍt trong thời gian 1 phút ở điờ̀u kiợ̀n tiờu chuõ̉n.
1 UI = 1àmol cơ chṍt / phút
- Đơn vị Katal (Kat): Là lượng enzyme có khả năng xúc tác làm chuyờ̉n hoỏ 1 mol cơ chṍt trong thời gian 1 giõy ở điờ̀u kiợ̀n tiờu chuõ̉n.
1 Kat = 1 mol cơ chṍt / giõy 1 UI = 16,67 nKat (nanoKatal)
- Đơn vị hoạt độ riờng:của mụ̣t chờ́ phõ̉m enzyme là sụ́ đơn vị UI hoặc Kat ứng với 1 mililit dung dịch (nờ́u dạng lỏng) hoặc 1 miligam protein (nờ́u dạng khụ) của chờ́ phõ̉m.
Đụ̣ hoạt đụ̣ng riờng của enzyme cho phộp đánh giá mức đụ̣ thuõ̀n khiờ́t của phõ̉m vọ̃t enzyme.
- Hoạt độ riờng của phõn tử: là sụ́ phõn tử cơ chṍt được chuyờ̉n hóa bởi 1 phõn tử enzyme trong mụ̣t đơn vị thời gian.
Cõ̀n lưu ý rằng, khi đo hoạt đụ̣ enzyme, lượng cơ chṍt phải đủ thừa đờ̉ bóo hũa enzyme, nhưng nờ́u cơ chṍt thừa quá nhiờ̀u thì sẽ gõy ức chờ́ hoạt đụ̣ng enzyme.
Hoạt đụ̣ của enzyme phụ thuụ̣c vào nhiờ̀u yờ́u tụ́ như pH, nhiợ̀t đụ̣, bản chṍt của cơ chṍt, sự có mặt của chṍt kìm hãm, vv...