IV. SỰ PHÂN LOẠI SINH GIỚ
4.kỹ thuật điện di protein
Các loại protein có khối l−ợng phân tử khác nhau, do vậy chúng có tốc độ di chuyển khác nhau trong điện tr−ờng, vì thế có thể tách đ−ợc các loại protein nhờ ph−ơng pháp điện dị Từ kết quả phân tích thành phần điện di mà ngừi ta có thể đạt đ−ợc những mục đích nghiên cứu khác nhaụ
4.1. Các ph−ơng pháp điện dị
Kỹ thuật điện di protein bao gồm ph−ơng pháp điện di một chiều và điện di hai chiềụ Các kỹ thuật này cho phép phân tách hốn hợp phức hệ protein thành những tiểu phần khác nhau dựa trên nguyên tắc tốc độ dịch chuyển khác nhau theo khối l−ợng phân tử của các tiểu phần đó.
* Kỹ thuật điện di protein một chiều giúp ng−ời ta có thể tách đ−ợc các tiểu phần protein trong protein tổng số tan trong dung dịch NaCl 1M và protein tan trong n−ớc. Dựa vào các băng điện di có thể so sánh thành phần điện di giữa các mẫu nghiên cứu, xác định tính đa dạng sinh học trên cơ sở hiện t−ợng đa hình protein.
* Kỹ thuật điện di protein hai chiều giúp cho các nhà sinh học phân tử phân tách các tiểu phần protein, định tính và định l−ợng các loại polypeptit. Kỹ thuật điện di còn đ−ợc ứng dụng để xác định các thể đột biến, xác định sự đa hình protein.
Về mặt lý thuyết kỹ thuật điện di hai chiều có thể phát hiện hai loại đột biến: - Đột biến do có sự thay thế một hay nhiều nucleotit, mất cặp nucleotit. - Đột biến do sự biến đổi trình tự nucleotit.
Ngoài ra, kỹ thuật điện di protein hai chiều trên gel polyacrylamid còn đ−ợc ứng dụng trong việc nghiên cứu:
- Biểu hiện gene ở giai đoạn phát triển sớm của câỵ
- Xác định đ−ợc nhiều chỉ thị protein liên quan đến các tính trạng hình thái khác của cây trồng...
4.2. Quy trình thực hiện.
Kỹ thuật điện di protein có thể thực hiện theo các b−ớc:
Dịch chiết chứa protein Làm biến tính protein bằng nhiệt Điện di ở thế hiệu khác nhau Chụp ảnh và phân tích kết quả điện di
- Khi thực hiện phân tích điện di protein tr−ớc hết ng−ời ta chế tạo bản gel điện di protein (VD gel polyacrylamid).
- Tra dịch chứa protein đã biến tính vào "giếng" trên bản gel polyacrylamid, đặt hai đầu mép gel lên điện tr−ờng, chạy điện di với hiệu điện thế khác nhau trong 1,5 - 2 giờ.
- Gel đ−ợc cố định bằng tricloaxetic, ngâm vào dung dịch nhuộm màu coosmasie blue R-250. Sản phẩm điện di protein đ−ợc chụp ảnh để phân tích.
Thiết bị điện di bao gồm máy điện di và bộ nguồn. Máy điện di có thể là điện di đứng hoặc điện di ngang.
Gel sử dụng điện di protein có thể là polyacrylamide chứa SDS hay không có SDS. Ngoài ra có thể là gel thạch agar, gel agarosẹ