Tiến hành thử nghiệm:

II Thu nhập/ha/vụ (3 tháng) Tấn 3,6 50

3. Tiến hành thử nghiệm:

a) Tiến hành ester hoá:

- Chuyển một lượng dung dịch lipit khoảng 6mg vào một ống ly tâm thể tích 20ml có nắp chặt, chịu nhiệt tốt.

- Làm khô mẫu bằng khí nitơ.

– Thêm 1ml chất xúc tác MeOH : Toluen (tỉ lệ 3:2) và 1ml Acetyl chloride : Methanol (tỉ lệ 1:20).

– Đuổi khí oxi trong ống cho bay lên bằng khí nitơ, đậy kín nắp và đem đi vortex. – Đặt vào khuôn máy gia nhiệt ở 1000C trong 1 giờ.

b) Tách chiết axit béo:

– Làm lạnh ống và cho thêm 1,5ml Hexan và 1ml nước cất. – Cho thêm 120l chất chuẩn nội Me C21:0

– Đuổi oxi bằng khí nitơ và đem đi vortex trong 1 phút. – Li tâm ở 1500rpm trong 5 phút.

– Dùng pipette pasture hút lớp dịch trong ở trên và lọc qua Na2SO4khan, cho dịch mẫu chảy xuống bình định mức 5ml.

– Lập lại sự chiết rút trên bằng cách cho thêm 1,5ml Hexan (lần 2) và 2ml Hexane (lần 3), li tâm và lọc.

– Định mức đến 5ml và lắc trộn đều.

– Dùng pipette hút 500l cho vào ống vial thể tích 2ml và làm khô bằng khí nitơ. – Sau đó cho thêm vào 300l n-Hexan, mẫu đã sẵn sàng để tiêm vào máy GC để

phân tích. Lưu giữ lạnh những ống mẫu còn lại trong tủ lạnh.

4. Xác định hàm lượng axit béo bằng máy sắc ký khí (GC)

a) Cài đặt các thông số:

- Bộ phận bơm mẫu – Inlets: nhiệt độ Inlets: 2500C,áp suất 7,98 psi.

- Cột – Colunms:

+ Mã cột: Agilent 19091F-112, HP-FFAP Polyethylence Glycol TPA.

+ Nhiệt độ cột: cao nhất là 2400C.

+ Tổng thời gian chạy trong cột: 20ml/min

+ Tốc độ khí nitơ chạy trong cột: 1,5 ml/min, áp suất 7,98psi + Lò nâng nhiệt – Oven:

Cài đặt nhiệt độ ban đầu:1200C Nhiệt độ lò nâng lên cao nhất:2300C. Chương trình nhiệt độ:

(0C/min) 0C Lưu(phút) Thời gian chạymẫu

Bắt đầu 120 1.00 1

2 3 4 5 6 10.00 0.5 4.00 10.00 0.00 180 184 190 210 0.00 0.00 0.00 2.00 6.5 14.50 16.00 20.00 Kết thúc 120 0.00 20.00

- Đầu dò tín hiệu – Detectors: + Nhiệt độ:2500C

+ Tốc độ dòng khí H2:40ml/min + Tốc độ dòng khí O2:400ml/min + Tốc độ dòng khí N2:45ml/min b) Thực hành bơm mẫu trên máy GC

- Trước khi bơm mẫu vào máy để phân tích, cần phải dung môi hexane để rửa cột, loại bỏ các tạp chất bám dính tên thành cột và kiểm tra độ ổn định của các khí lưu động trong máy. Chương trình nhiệt độ để nâng nhiệt lò Oven được sử dụng như chương trình chạy mẫu.

- Sau khi rửa cột, tiêm mẫu chuẩn để xác định các peak chuẩn. Dựa trên diện tích của peak chuẩn và nồng độ đã biết trước (0.005g/ml) để xác định hàm lượng axit béo của mẫu.

- Tiêm mẫu.

- Kiểm tra tất cả các thông số ở trên. Nếu bơm mẫu bằng hệ thống tự động thì phải sắp xếp các vial chứa mẫu cho đúng vị trí, cài đặt thông số của lượng mẫu bơm vào là 1l và chuẩn bị sẵn sàng các thao tác điều khiển máy bơm mẫu. Sau đó nhấn nút Start để bắt đầu rửa kim bơm và bơm mẫu. Nếu thao tác bơm mẫu bằng tay, đòi hỏi thao tác phải chính xác cho mỗi lần bơm, trước khi bơm mẫu phải bơm dung môi hexane để rửa kim, khoảng 2-3 lần, sau đó bơm 1l mẫu.