ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM MỤC TIÊU
3.8.3. Tiến hành khử
a. Xây dựng biểu đồ mẫu
Muốn xây dựng biểu đồ mẫu dùng vitamin A axetic (loại tinh khiết) hịa tan trong clorofoc, hoặc cĩ thể dùng arovit đã được qui định là 1ml dung dịch cĩ 300.000UI vitamin A.
Trước hết xác định tỷ trọng của arovit để biết được lượng cần thiết để cân .
Ví dụ : Tỷ trọng 0,917, cân 0,0917gam thật chính xác sẽ tương ứng với 30.000UI vitamin A. Hịa tan trong clorofoc để được điều chế lại và cho thêm clorofoc vừa đủ 100ml, 1ml dung dịch chứa 300UI.
Từ dung dịch này pha các dung dịch (với clorofoc chứa 60; 42; 36; 24;15; 3 UI vitamin A trong 1ml). Tiến hành xây dựng biểu đồ mẫu với các dung dịch này, theo cách thức ghi ở đoạn sau:
b. Định lượng mẫu thử
Nguyên liệu rắn được cắt thải nhỏ, nghiền tán thật nhiễn với cát sạch trong cối sứ. Lượng cần tùy thuộc vào hàm lương vitamin A hoặc 12µg vitamin A hoặc 13,76µg vitamin A Axetat. Cho vào bình cầu cĩ nút nhám, thêm KOH 2N trong cồn với hàm lượng vừa đủ để phủ kín mẫu thử sau khi lắc trộn đều.
Xà phịng hịa trên nồi cách thủy sơi, với ống sinh hàn hồi lưu, trong khí nitơ 30 phút. Ngay khi dung dịch cịn nĩng, cho thêm một lượng tương đương nước vào và tập trung tất cả vào bình cầu lắng gạn.
Chú ý: Lượng nước khơng được quá 3 lần lượng KOH 2N để tránh hình thành nhủ tương cĩ thể gây mất vitamin A khi chiết xuất.
Chiết xuất vitamin A từ dung dịch đã xà phịng hĩa như đã ghi ở trên bằng cách lắc với 50ml etetách phần ete, cho vào bình lắng gạn khác cĩ chứa sẳn 50ml nước, chiết xuất lại lần 2 với 50ml ete cho đến khi nào lớp ete khơng cịn cĩ màu (tối thiểu 4 lần). Lớp ete chiết được tập trung hết vào bình lắng gạn, rữa với 50ml KOH 3% và nhiều lần với nước (mỗi lần 50ml) cho đến khi khơng cịn vết kiềm (thử với phenolphetalein). Loại nước trong dịch ete bằng cách lọc hút chân khơng qua một lớp Na2SO4 khan đựng trong phễu lọc cĩ màng xốp. Rữa lớp Na2SO4 ba lần mỗi lần với 10ml ete, cũng bằng cách hút chân khơng.
Tập trung tất cả lớp ete lại, cất ete trong luồng khí nitơ nhẹ ở 600C trên nịi cách thủy khi cịn lại một ít ete để bay hơi tự nhiên khơng gia nhiệt.
Cặn cịn lại hịa tan vào 2ml clorofoc định lượng theo phản ứng lên màu carr-price. Cho vào cốc so màu dày 10mm.
0,25 ml dịch thử và 1/3 anhyđric axetic; 3ml thuốc thử SbCl3. Khi cho thuốc thử SbCl3 vào bình cho thẳng vào ngay giữa cốc bằng pipet sơranh, thời gian chảy hết vào ống từ 1 đến 3 giây.
Sau 5 giây, màu xanh hình thành lên đến cực đại, đo ngay ở quang sắc kế với lọc số s61 (bước sĩng 619 nm). Đọc tắt quang học nén vào khoảng giữa. 0,25 - 0,05 nếu cao quá cần pha lỗng thêm clorofoc. Nếu thấp quá cần chiết xuất lại với lượng nguyên liệu nhiều hơn. Điều chỉnh máy bằng clorofoc tinh khiết.
Tồn bộ kiểm nghiệm phải tiến hành liên tục, tránh ảnh hưởng của khơng khí và ánh sáng, tốt nhất làm với dụng cụ thủy tinh màu nâu.
Phương pháp này cĩ độ chính xác ±5%, độ nhày từ 1 đến 3 quốc tế UI cho 1g nguyên liêu.
Chú ý:
Nếu nguyên liệu cĩ nhiều đường kính và các dạng đường đơn khác, cân thẳng nguyên liệu vào trong bình cầu, cho thêm một ít vào đun nĩng nhẹ, sau đĩ mới cho lượng cần thiết KOH trong cồn và tiếp tục như ghi bên trên.
Đối với vitamin A định lượng trực tiếp và vitamin A định lượng sau khi xà phịng hĩa, kết quả cĩ khác nhau, do đĩ cần phải làm hai biểu đồ khác nhau và sử dụng biểu đồ theo từng trường hơp.