ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM MỤC TIÊU
3.13.2. Phương pháp Tinma n( Tillma n)
a. Nguyên lý
Định lượng vitamin C với phương pháp Timan dựa trên sự oxy hĩa của axit ascocbic với 2 – 6 điclorophenol indophenol thành axit dehydro ascocbie và 2 – 6 diclophenol indophenol sẽ chuyển thành dẫn xuất (lenco derive ) khơng màu, phản ứng tới thích ở mơi trường pH = 3 – 4. Trong mơi trường này cĩ một giọt 2,6 dicloro phenol và indophenol xanh thừa sẽ chuyển thành màu đỏ hồng.
Nếu trong thực phẩm cĩ axit dehydro ascocbie, khi cần thiết chuẩn độ Vitamin C tồn phần, cần thử axit dehydro ascocbie về axit ascocbie bằng H2S và chuẩn với thuốc thử : Timan.
b. Dụng cụ, vật liệu và thuốc thử
- Cát sạch khơng lẫn sắt.
- Dung dịch thủy ngân II axetal : hịa tan 2g Hg(CH3OO)2 vào 1 lít nước, để yên 1 đêm, sau đĩ đem lọc và thêm nước cất đến vừa đủ 100ml.
- Dung dịch chì và Natriaxetal : Pb(CH3OO)2 kết tinh 125 ml CH3COONa kết tinh 500g Nước cất vừa đủ 1000ml - Dung dịch axit metaphophoric 2%
- Axit tricloaxetic 10% - Dung dịch HCl 1% - Dung dịch NaOH 10%
- Dung dịch iốt 0,01N: Dung dịch iốt 0,1N 10ml Dung dịch KI 2,5% vừa đủ 100ml
- Dung dịch axit ascocbic 0,1N : Axit metaphotphoric 2% 100ml Dung dịch CH3COONa 68,03% 17,8 ml Lắc hịa tan rồi thêm : 0,100g axit ascocbie.
Lắc hịa tan. Xác định hệ số hiệu chỉnh bằng dung dịch iốt 0,01N với nước hồ tinh bột làm chỉ thị màu.
- Dung dịch axit ascocbie 0,001N
Dung dịch axit ascocbie 0,01N 10ml
Dung dịch axit metaphotphoric + Natriaxetal như tỉ lệ như trên vừa để 100 ml. Dung dịch này chỉ giữ được 2 – 3 ngày.
- Dung dịch 2 – 6 diclorophenol indophenol 0,001N 2 – 6 dicloro phenol indophenol 0,268g
Nước cất 2 lần khoảng 300ml
Hịa tan ở nhiệt độ khoảng +500C, để nguội và thêm nước cất 2 lần vừa đủ 100ml.
Để yên một đêm. Sau đĩ lọc qua giấy lọc gấp. Dung dịch này giữ trong chai màu và để trong tủ lạnh, cĩ thể bảo quản trong 4 tuần, khi dùng chuẩn độ lại bằng dung dịch axit ascocbie 0,001N.
c. Tiến hành thử
+ Định hướng axit ascocbic:
Cân 5 – 10 g thực phẩm đã cắt nhỏ với dao khơng rỉ cho ngay vào cối sứ với 1 ít axit metaphotphoric 2%, một ít cát sạch và nghiền nhỏ, thêm dần 10ml HCl 1%, chuyển tất cả vào ống ly tâm, ly tâm 10 phút và đổ gạn dịch chiết bên trên vào bình mức 100ml. Rửa bã 3 lần, mỗi lần với 10ml axit metaphotphoric 2%; khuấy đều và ly tâm, gạn nước trong ở trên vào bình định mức, cuối cùng cho thêm dung dịch axit metaphotphoric 2% vừa đủ 10ml lắc đều.
Hút 10ml dịch chiết, cho vào bình chuẩn độ và định lượng với dung dịch 2 – 6 dicloro phenol indophenol 0,001N cho đến màu vàng nhạt bền vững.
Song song với định lượng chính thức làm một mẫu trắng như sau : lấy 10ml dịch chiết cho vào bình chuẩn độ cho thêm 1ml dung dịch CuSO4 1%. Đun 10 phút ở cách thủy sơi để phá hủy hết Vitamin C. Để nguội và chuẩn độ bằng dung dịch 2 – 6 diclorophenol indophenol 0,001N.
d. Tính kết quả
Hàm lượng axit ascocbie tính bằng mg trong 100g thực phẩm: 0,088 – ( V2 – V1) . 100 . 100
_____________________________________10. P5 10. P5
0,088mg = số mg axit ascocbie tương ứng với 1ml dung dịch 2 – 6 diclorophenol indophenol 0,001N.
V1 = số ml 2 – 6 diclorophenol indophenol 0,001N dùng để định lượng mẫu trắng (sau khi phá hủy axit ascocbie bằng CuSO4)
V2 = số ml 2 – 6 diclorophenol indophenol 0,001N dùng để định lượng mẫu dịch chiết P5 = số gam thực phẩm cần để chiết xuất axit ascocbie.
+ Định lượng Vitamin C tồn phần ( gồm axit ascocbie và axit dehydroascocbie)
Sau khi đã chiết xuất Vitamin C ở mơi trường axit metaphotphoric và cho vừa đủ 100ml. Lấy 20ml dịch chiết cho vào bình nĩn 2 – 3 ml NaOH 10% cho đến pH = 4 – 5. Cho tiếp ngay 3ml dung dịch thủy ngân axetac và 3ml dung dịch “chì natriaxetat” khơng đợi loại bỏ kết tủa, cho chạy ngay 1 luồng khí H2S vào hổn hợp dịch trên cho đến khi nước ở phía trên trong suốt. Đĩng ngay nút bình nĩn lại và để trong chổ tối 24 giờ. Sau đĩ loại bỏ cặn đen bằng cách lọc qua giấy
lọc và cho chạy ngay một luồng khí CO2 để đuổi hết khí H2S (thử với giấy chì axetat cho đến khi khơng cịn màu đen) chuyển dung dịch vào bình định mức dung tích 100ml, tráng rửa bình nĩn bằng nước cất và cuối cùng cho nước cất vừa đủ 100ml.
Hút 10ml axit hĩa với 2ml dung dịch axit tricloaxetic 20% cho đến pH = 3 – 4 chuẩn độ với dung dịch 2-6 điclorophenol indophenol 0,001N cho đến màu hồng nhạt:
d. Tính kết quả
Hàm lượng Vitamin C tồn phần tính bằng mg trong 100g thực phẩm. 0,088 . N . 100. 100. 100
_______________________________10 . 10 . P5 10 . 10 . P5
Trong đĩ : V = số ml 2-6 diclorophenol indophenol 0,001N dùng để chuẩn độ mẫu thử P5 = số gam thực phẩm cần để chiết suất Vitamin C.