ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ MẪU THỰC PHẨM MỤC TIÊU
3.8. Xác định Vitami nA
3.8.1. Nguyên lý
Vitamin A chiết từ phần khơng xà phịng hố của thực phẩm, được tách khỏi caroten và các sắc tố khác bằng kỹ thuật sắc ký cột. Sản phẩm phản hấp thụ, được hịa tan trong clofoc và lên màu theo phản ứng CARR- PRICE, với antimon triclorua và anhydrit axetic cường độ màu xanh hình thành được đo bằng quang sắc kế.
3.8.2. Dụng cụ, vật liệu và thuốc thử
−Cối chày sứ hoặc thủy tinh. −Bình lắng gạn.
−Bình cầu nút nhám. − Pipet kiểu sơ lanh.
−Máy cắt cĩ lắp ống sinh hàn hồi lưu. −Dụng cụ hút chân khơng.
−Quang sắc kế. −Cát sạch.
−Phenolphetalein 1% trong cồn. −Dung dịch KOH 3% trong nước. −Anhydric Axetic.
−Ete tinh khiết khơng chứa peroxyt.
Trước hết định tính peroxyt trong ete với thuốc thử vanasunfuric. Thuốc thử vanasunfuric: + Vanađisunfat: 0,01g.
+ H2SO4 đậm đặc: 2ml. + Nước cất vừa đủ: 50ml.
Hịa tan 0,10g vanađisunfat trong 2ml H2SO4 đậm đặc. Sau đĩ cho nước vừa đủ 50ml. Khi thử cho vào ống nghiệm: 10ml Ete và 2ml thuốc thử vanađisunfuric. Nếu thấy xuất hiện màu đỏ là cĩ peroxyt, cần phải khử như sau:
Cho vào bình cầu: + Dung dịch KOH 15% trong nước 1 thể tích. + Dung dịch FeSO4 10% trong nước 1 thể tích. Lắc đều cho thêm 20 thể tích Ete, lắc đều.
Thử phản ứng peroxyt, với thuốc thử vanađisunfuric, nếu khơng thấy lên màu, tức là đã khử hết peroxyt, rửa Ete vài lần với nước cất, lượng nước dùng mỗi lần bằng thể tích của ete. Sau khi tách bỏ phần nước, làm khơ ete bằng cách lắc với Na2SO4 khan, cất lấy ete tinh khiết khan (bỏ phần đầu và phần cuối).
Nếu ngay lần đầu định tính khơng thấy peroxyt, nghĩa là khơng lên màu với thuốc thử vanađisunfuric khơng phải làm tiếp phần sau, mà cất luơn lấy ete tinh khiết
−Clorofoc tinh khiết:
Clorofoc thường cĩ chứa một lượng cồn để bảo quản, phải được loại bỏ, lắc clorofoc 3 lần với nước, mỗi lần với một thể tích tương đương nước, loại nước bằng cách lắc với Na2SO4 khan trong 30 phút, gạn lọc qua một lớp Na2SO4 khác và cuối cùng cất ở nồi cách thủy lấy clorofoc tinh khiết (bỏ phần đầu và phần cuối). Clorofoc chỉ dùng trong 2/3 ngày.
Muốn giữ clorofoc lâu hơn (nhiều tuần) cho clorofoc mới cất vào chai thủy tinh sẫm màu với Al2O3 hoạt tính cao, lắc đều và bảo quản tránh ánh sáng, trong tủ lạnh, khi dùng lắc đều mạnh
– CH = CH– C = CH – CH = CH – C = CH – CH – CH 2OH CH3
và lọc qua ba lớp giấy lọc gấp, 50ml dịch lọc đầu tiên bỏ đi hoặc lọc lại vì Al2O3 cũng phá hủy vitamin A.
−Thuốc thử SbCl3 (Antimoan triclorua).
Hồ tan một lượng thừa SbCl3 vào clorofoc vừa tinh chế bằng cách nung nĩng nhẹ. Để nguội dần và bảo quản kín, tránh ẩm. Dung dịch chứa 22% SbCl3 và ở nhiệt độ thường cĩ tinh thể SbCl3 lắng ở đáy chai.
Na2SO4 khan: Nung trong l phút nung để loại nước và dùng trong ngày. Na2SO4 khan phải khơng cĩ sắc và phải được thử lại khơng hấp thụ vitamin A.
Dung dịch KOH trong cồn: Dung dịch KOH 2N trong cồn 960 phải được pha chế hàng ngày và khơng được cĩ cacbonat.
Khí N2: Khí nitơ chứa trong bình thép, trước khi sử dụng cho sục qua một dung dịch pyrogalot kiềm (6 thể tích dung dịch KOH 60% trong nước, pha với một thể tích dung dịch pyrogalot 25%).
Nhơm oxyt hoạt tính (Al2O3): Được nung trong lị nung 3 giờ ở 5000C và giữ trong chân khơng. Khi tiến hành sắc ký dùng 50g Al2O3 trộn vào 5,5 ml nước trong một lọ cĩ nút nhám, lắc trộn đều cho đến khi nào khơng cịn đĩng cục ván nữa. Đĩng nút kỹ hoặc tính qua một ngày cịn giữ được.