1 Sữa on g2 Mật ong ăn ho a3 Mật ong ăn nhựa cây
3.21.2. Định tính mì chính bằng phương pháp sắc ký trên giấy
a. Nguyên tắc
Nguyên tắc của sắc ký trên giấy là dựa vào tính chất của các chất cĩ hệ số phân chia khác nhau trong hai dung mơi khơng hồ lẫn nên sắc ký trên giấy cịn gọi là sắc ký phân chia trên giấy.
Đối với dung mơi đặc hiệu, sự duy chuyển của một chất được đặc trưng bởi hệ số Rf.
Rf = Quảng đường đi của chất
Quảng đường đi của dung môi
b. Dụng cụ, vật liệu và thuốc thử
- Giấy sắc ký Whatman số 1 hoặc FN số 4.
- Dung dịch axit glytamic chuẩn ( axit glutamic 10 mg/10ml H2O).
- Dung mơi buatnol: axit axetic : H2O tỷ lệ 4:1:5 theo thể tích. Lắc đều trong bình gạn, để yên 1 – 2 ngày cho tách thành hai lớp rõ rệt.
- Lớp trên là lớp butanol bão hồ nước, cho thêm 1 – 2% butanol nữa để làm dung mơi chạy sắc ký.
- Thuốc thử hiện màu: Minhyđrin 0,2% thêm axeton vào vừa đủ 100 ml. - Bình hoặc chuơn thuỷ tinh kín.
- Micropipet hoặc ống mao dẫn nhỏ để chấm sắc ký. - Bình phun thuốc thử lên màu.
c. Kỹ thuật tiến hành
Sắc ký trên giấy một chiều đi lên cĩ trang bị đơn giản hơn cả. Cĩ thể tự trang bị bằng cách dùng một bình hoặc một chuơn thuỷ tinh cĩ nắp đạy kín. Cĩc đựng dung dịch đặt dưới bình cĩ thể bằng một hộp lồng ( nếu khơng cĩ hộp lồng thích hợp với kích thước của bình thì cĩ thể cho thẳng dung mơi vào đáy bình).
Kẻ một đường thẳng bằng bút chì cách mép dưới tờ giấy chạy sắc ký khoảng 2 -3 cm đường kẻ này. Trên đường kẻ này, dùng mocropipet chấp vết axit glutamic chuẩn cạch các vết dung dịch mì chính cần thử. Khoảng cách các vết chấm từ 3 – 4 cm. Thể tích các vết chấm từ 20 – 30 µl. Chấm làm nhiều lần, chờ khơ lại chấm. Cĩ thể dùng máy sấy tĩc sấy nhẹ cho khơ. Đường kính mỗi vết càng gọn nhỏ càng tốt, thường khơng quá 0,7 cm. Sau khi chấm sắc ký, cuộn giấy thành hình trụ đặt vào trong bình sắc ký đã chứa dung mơi butanol bão hồ nước. Đậy kín bình. Khi dung mơi đã triển khai gần hết tờ giấy chạy sắc ký, lấy ra để khơ ở nhiệt độ phịng. Phun dung dịch ninhydrin 0,2% để hiện màu. Cĩ thể để khơ tự nhiên hoặc sấy nhẹ ở tủ sấy ( 600C trong 30 phút). So sánh Rf của vết màu hiện lên ở dung dịch mì chính cần thử với vết dung dịch axit glutamic chuẩn. Nếu dung dịch mì chính sau khi triển khai trên giấy sắc ký cĩ một vết duy nhất và cĩ cùng Rf với axit glutamic chuẩn là mì chính tinh khiết khơng cĩ lẫn tạp chất khác.