VIIxxxxx xxx
4.6.1. K ết quả thực hiện công nghệ tế bào để sản xuất virus làm vacxin
Công nghệ nuôi cấy tế bào sơ cấp từ phôi gà:
Nuôi cấy tế bào sơ cấp phôi gà (cultivation of primary embryonic cells) là nuôi cấy các tế bào tách chiết từ hỗn hợp mô phôi gà trong các môi trường dinh dưỡng thích hợp để tế bào nhân lên và sử dụng một lần (có thể chuyển thành thứ cấp 1 - 2 đời) cho nuôi cấy virus thích ứng. Phôi gà (9 - 14 ngày tuổi) cung cấp nguồn mô/cơ quan để có tế bào sơ cấp nuôi cấy nhân tạo và cung cấp môi trường tế bào cho nuôi cấy virus thích ứng. Hiện nay có 4 loại tế bào sơ cấp nuôi cấy lấy từ nguồn phôi gà, đang được sử dụng thông dụng, đó là: i) Tế bào
91
(Chicken embryo kidney cells, CEKC); iii) Tế bào gan phôi gà (Chicken
embryo liver cells, CELC hoặc CEL); và iv) Tế bào biểu bì phôi gà (Chicken embryo dermal cells, CED) [24]. Đối với adenovirus loài chim (FAd, Fowl adenovirus), tế bào gan phôi gà (CEL) là môi trường thích hợp cho chúng nhân lên [35], cho dù là adenovirus chim phân lập trong tự nhiên hay adenovirus vector tái tổ hợp [13]. Về nguyên tắc, tế bào gan phôi gà được chuẩn bị từ gan phôi gà có độ tuổi phôi khoảng 10 - 14 ngày, phần lớn sử dụng gan phôi 13 ngày tuổi là tốt nhất.
Yêu cầu cần có công nghệ tế bào nuôi cấy giống và vacxin adenovirus tái tổ hợp FAd-9-VP2 (L/R):
Giống nguyên gốc FAd9-VP2-L và FAd9-VP2-R, được tạo ra và giữ giống gốc trên môi trường tế bào Hepatoma dòng thuần (dòng CH-SAH), nhưng giống thứ cấp có thể tiếp truyền được trên môi trường tế bào gan phôi gà
(CEL) và môi trường tế bào CEL được sử dụng để sản xuất giống cấp 1/vacxin FAd9-VP2 (gồm: FAd9-VP2-L và FAd9-VP2-R). Sau khi tiếp nhận giống gốc, Viện Công nghệ sinh học đã tiến hành kiểm tra kiểm nghiệm giống, đồng thời chuyển giao cả hai loại FAd9-VP2-L và FAd9-VP2-R cho Công ty thuốc thú y trung ương (NAVETCO), cùng hợp tác tiến hành thử nghiệm công nghệ tế bào gan phôi gà, để tiếp truyền, kiểm tra môi trường nuôi cấy và sản xuất vacxin. Xuất phát từ yêu cầu đó, chúng tôi tiến hành khám phá và thực hiện công nghệ nuôi cấy tế bào gan phôi gàđể tiếp truyền giống, giữ giống, kiểm tra giống và sản xuất một lượng vacxin ở qui mô nhỏđể thử nghiệm.