VIIxxxxx xxx
4.5.5. K ết quả kiểm tra giống FAd9-VP2-L và FAd9-VP2-R bằng sinh học phân tử
học phân tử
Nguyên liệu để tách chiết DNA hệ gen adenovirus tái tổ hợp là dịch nuôi giống gốc và một số lô vacxin (sản xuất trên tế bào gan phôi gà) và phương pháp thực hiện là PCR sử dụng cặp mồi E1F – E1R, sản phẩm thu được có kích thước khoảng 1,35 kb, được mô tả ở mục 3.2.7 và 3.2.14 (phần thứ ba: Nguyên liệu và Phương pháp nghiên cứu). Gen kháng nguyên VP2 đã được gài vào hệ gen FAd9 tạo nên tái tổ hợp FAd9-VP2 nếu được phát hiện bằng PCR bằng cặp mồi đặc hiệu, thì kết luận đã có gen VP2 gài vào trong hệ gen FAd9 tái tổ hợp. Phản ứng PCR được thực hiện với khuôn là một số lô giống nguyên gốc và giống sản xuất trên tế bào gan phôi gà, chu trình nhiệt:
Hình 4.13: Kết quảđiện di gen VP2 sử dụng cặp mồi E1F-E1R (~ 1,35kb) 1. Sản phẩm gen VP2 của giống gốc FAd9-VP2 (FAd9-VP2-L)
2. Sản phẩm gen VP2 giống gốc FAd9-VP2 (FAd9-VP2-R)
3. Sản phẩm gen VP2 giống thứ cấp FAd9-VP2 (FAd9-VP2-L) làm vacxin. 4. Sản phẩm gen VP2 giống thứ cấp FAd9-VP2 (FAd9-VP2-R) làm vacxin. 5. Đối chứng (+): của sản phẩm gen VP2 lưu giữ trong vector pCR2.1.
Nhiệt độ Thời gian Số chu kỳ
94oC 5’ 1 94oC 55oC 72oC 1’ 1’ 2’ 35 72oC 10’ 1 4oC Bảo quản mẫu 2kb 0,5kb M 1 2 3 4 5 1,35kb 2kb 0,5kb M 1 2 3 4 5 1,35kb
89
Sản phẩm của phản ứng PCR được kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1% . Kết quảđiện di được thể hiện ở Hình 4.13.
Hình ảnh điện di cho thấy gen VP2 (1,35 kb) đã được tái tổ hợp vào adenovirus FAd9 (FAd9-VP2), có kích thước tương ứng là 1,35 kb là sản phẩm PCR hiển thị băng sáng tương đương với độ dài dự kiến.