K ết quả chuyển nạp:
5.4.5.1. Đặt vấn đề thực hiện kiểm tra
Plasmid pAd-Shuttle-VP2, là một vòng DNA có độ dài khoảng 33,5 kb. Khi cần thiết sản xuất DNA của chúng, có thể chuyển nạp vào tế bào BJ5183 và tiến hành chọn lọc, nuôi cây khuẩn lạc và tách chiết DNA của chúng theo qui trình thông thường, trong đè tài này, chúng tôi sử dụng bộ kit tách DNA plasmid của hãng Bioneer, Hàn Quốc (AccuPrep Plasmid Extraction Kit).
DNA của plasmid pAd-Shuttle-VP2 cần được kiểm tra bằng các phương pháp khác nhau, bao gồm phương pháp cắt bằng enzyme giới hạn để kiểm nghiệm độ dài (EcoRI; PmeI và EcoRI và PacI). Một số lý giải như sau:
i) Với EcoRI: Trong thành phần nucleotide của plasmid pAdEasy-1 có hai điểm cắt của EcoRI; nhưng trong plasmid pAd-Shuttle-VP2 chỉ có một điểm cắt của EcoRI. Do vậy, khi cắt mở vòng, nếu đúng là pAd-Shuttle-VP2, thì chỉ
có một đoạn DNA kích thước khoảng 33,5 kb sẽ thu nhận được.
ii) Với EcoRI và PmeI: Vector tái tổ hợp pAd-Shuttle-VP2 có một điểm cắt của EcoRI tại vị trí 26414 và một điểm cắt của PmeI (GTTTAAAC) tại vị trí
142
12600, khi cắt bằng hai enzyme EcoRI và PmeI thì vector tái tổ hợp này sẽ cho ra hai đoạn DNA là 14 kb và 21,3 kb.
iii) Với PacI: Theo tính toán của chúng tôi, vector tái tổ hợp pAd-Shuttle- VP2, phải có hai điểm cắt của PacI (TTAATTAA), nằm ở hai đầu biên của phần khung DNA của adenovirus tái tổ hợp mang hộp gen VP2. Khi cắt bằng
PacI, thì vector tái tổ hợp này sẽ cho sản phẩm là hai đoạn DNA, kích thước 27,5 kb và khoảng 5,8 kb. Theo qui trình tạo adenovirus tái tổ hợp, chúng tôi cũng cần cắt pAd-Shuttle-VP2 bằng PacI, thu nhận đoạn DNA lớn giới hạn bởi
PacI để tạo adenovirus tái tổ hợp.