Các giải pháp khử trùng môi trường

- Nuôi cấy bề mặt (surface cultivation): Thường vi sinh vật phát triển trên bề mặt mơi trường Ví dụ, vi sinh vật phát triển trên bề mặt môi trường thạch trong hộp Petri hay phát

1. Bể hiếu khí khuấy trộn hồn tồn thơng thường.

4.2.3.3. Các giải pháp khử trùng môi trường

1. Nguyên tắc khử trùng môi trường

Môi trường thường được khử trùng trong nồi áp suất, thời gian khử trùng thường kéo dài 15 đến 30 phút khi đã loại hết khơng khí chỉ cịn hơi nước và đạt đến nhiệt độ và áp suất theo quy định. Ví dụ, áp suất đạt 0,5 atm thì nhiệt độ tương đương trong nồi là 105oC, còn nếu áp suất đạt 0,8 atm tương đương 105oC và 1,2 atm tương đương 121oC. Tuy nhiên, tuỳ theo tính chất và điều kiện cụ thể của từng loại mơi trường mà có chế độ và phương pháp khử trùng khác nhau (thông thường chế độ khử trùng được ghi kèm theo môi trường).

Điều quan trọng nhất của khâu chuẩn bị mơi trường là khử trùng, nếu mơi trường có chất dễ bị phân huỷ ở nhiệt độ cao kéo dài thì phải có chế độ khử trùng riêng. Tuy nhiên, hầu hết các loại môi trường được thanh trùng trong nồi áp suất cao, thời gian thanh trùng rút ngắn, vừa đảm bảo chất lượng môi trường, vừa tiết kiệm năng lượng. Mơi trường trong các bình nhỏ như bình tam giác hay bình thuỷ tinh được thanh trùng trong nồi áp suất riêng, cịn mơi trường lớn người ta thanh trùng ngay trong thiết bị lên men.

2. Khử trùng môi trường nuôi cấy bề mặt

Môi trường nuôi cấy bề mặt thường là các hợp chất rắn, xốp, gồm có cám, bột và các chất dinh dưỡng được tiệt trùng bằng hơi nóng trong thiết bị chuyên dùng với áp suất dư 0,05 Mpa để đạt được nhiệt độ 104 – 110oC. Để tăng hiệu quả tiệt trùng người ta cho vào môi trường trước khi gia nhiệt một chất kháng sinh là furaxin với tỷ lệ 1,5g cho 100g môi trường hoặc dung dịch formalin 40% với tỷ lệ 0,2% trong nước làm ẩm môi trường.

Tiệt trùng bằng hơi nóng có thể qua hai giai đoạn: Nâng nhiệt tới 100oC và đảo khối môi trường liên tục trong 15–20 phút; sau đó nâng tới 110oC khoảng 60-90 phút và cứ sau 15 phút lại đảo mơi trường 3-5 phút.

Phịng nuôi và các khay đựng môi trường cũng được tiệt trùng. Môi trường sau khi khử trùng được chia vào các khay coi như môi trường vô trùng, được làm nguội và được tiếp giống cho vào lên men.

3. Kiểm tra trạng thái vô trùng

Kiểm tra trạng thái vô trùng của môi trường cũng như cả hệ thống thiết bị trước khi bắt đầu và trong quá trình lên men, đặc biệt là pha sinh trưởng, là việc làm rất cần thiết, vì nếu tạp nhiễm thì cả q trình ni cấy có thể bị phá huỷ hoàn toàn.

Trong lên men bề mặt cần kiểm tra vô trùng môi trường sau khi khử khuẩn và nước làm ẩm bổ sung vào môi trường. Cách làm: Lấy mẫu và cấy vào các đĩa Petri có mơi trường thạch- thịt- pepton hoặc thạch- malt, sau đó gói bằng giấy sạch và để vào tủ ấm 30-37oC trong 24 giờ kiểm tra kết quả.