5. Bố cục luận án
2.3.7.2. Đánh giá chỉ tiêu chất lượng, cảm quan và an toàn thực phẩm của chế phẩm
AGIs
Mỗi mẫu 1 lít dịch từ dịch chiết của đỗ đen lên men (chiết xuất ở điều kiện: nhiệt độ 600C/ 10 phút siêu âm 20kHz với cường độ 8 W/cm2, chiết xuất ở tỷ lệ ethanol 50% / bột đỗ đen lên men (hạt bột Φ 0,8 mm) là 6 lít / kg,) được khảo sát xác định cô sấy ở các nhiệt độ khác nhau: 50 ± 2; 60 ± 2; 70 ± 2; 80 ± 2; 90 ± 2 và 100 ± 20C. Cô sấy cùng điều kiện - 0,8 atm, cao cô sấy khô đến độ ẩm 3,5%, được nghiền tạo chế phẩm AGIs, chế phẩm AGIs thu được đem xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase (mục 2.2.2) và cảm quan chế phẩm AGIs tạo ra.
2.3.7.2. Đánh giá chỉ tiêu chất lượng, cảm quan và an toàn thực phẩm của chế phẩm AGIs phẩm AGIs
Từ 5 kg chế phẩm AGIs tạo ra, lấy mẫu để phân tích:
- Các chỉ tiêu hoạt tính kìm hãm α-glucosidase, độ ẩm, hàm lượng proterin, lipit, tro tổng số, cảm quan, an toàn thực phẩm về kim loại nặng, vi sinh vật, aflatoxin dược xác định theo phương pháp xem mục 2.2.3; mục 2.2.4 và mục 2.2.6.
- Thử độc tính cấp chế phẩm theo phương pháp của Đỗ Trung Đàm, 1996 [4]: Chuột nhắt trắng thực nghiệm được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm 5 ngày trước khi thí nghiệm để chuột thích nghi điều kiện thí nghiệm. Chuột đạt yêu cầu về cân nặng 20 ± 2 g sẽ được đưa vào thí nghiệm. Đường dùng thuốc: đường uống, cho chuột uống bằng cách dùng bơm tiêm có kim đầu tù để đưa thuốc một cách nhẹ nhàng vào dạ dầy chuột.
Tiến hành thử nghiệm trên các lô chuột (mỗi lô 10 con) theo mức liều 0,25ml dịch chiết/ 10g chuột/ 1 lần. Khoảng cách giữa hai lần uống liên tiếp là 2 giờ. Chuột được để nhịn đói 15 giờ trước khi tiến hành thí nghiệm, cho uống nước theo nhu cầu. Theo dõi chuột liên tục trong vòng 6 giờ, tỉ lệ chết trong 72 giờ và các dấu hiệu khác trong vòng 7 ngày sau khi dùng chế phẩm thử.
Các chỉ tiêu theo dõi bao gồm: Tình trạng chung của chuột: hoạt động tự nhiên, tư thế, màu sắc (mũi, tai, đuôi), lông, phân, nước tiểu; Tỉ lệ chuột chết trong 72 giờ và các dấu hiệu khác trong vòng 7 ngày sau khi thử nghiệm; Xác định LD50 (nếu có) theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon.
Tìm liều tối đa mà không có chuột nào của lô thí nghiệm chết (LD0) và liều tối thiểu để 100% chuột của lô thí nghiệm chết (LD100). Thử thêm 3-4 liều trung gian giữa 2 liều nói trên để xác định LD50.
Thời gian theo dõi: Chuột được để ở phòng thí nghiệm có khí hậu đảm bảo để mọi hoạt động của chuột bình thường. Theo dõi và quan sát các biểu hiện về hành vi, hoạt động, ăn uống, bài tiết của chuột và số chuột sống chết trong 3 ngày.