I 2+ 2OH 2 + H2O O
KIỂM NGHIỆM THỰC PHẨM BẰNG MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CÔNG CỤ
3.3.2.2 Cơ sở lý thuyết phương pháp phân tích sắc ký lỏng cao áp
Nguyên tắc
Sắc ký lỏng là kỹ thuật phân tích sắc ký dùng để tách các ion hoặc các phân tử hòa tan trong dung dịch. Khi dung dịch mẫu tiếp xúc với một pha rắn hay một pha lỏng thứ hai, các chất hòa tan khác nhau trong dung dịch mẫu sẽ tương tác với các pha đó với một mức độ khác nhau dựa trên sự khác nhau về khả năng hấp phụ, khả năng trao đổi ion, khả năng phân bố hay dựa trên sự khác nhau về cấu trúc phân tử của các chất (sắc ký lọc gel). Sự khác nhau này sẽ tách các cấu tử ra khỏi hỗn hợp. Cấu tử nào có ái lực với pha động mạnh sẽ đi ra trước, cấu tử nào có ái lực với pha động yếu hơn sẽ đi ra sau. Các cấu tử được xác định thông qua thời gian lưu của cấu tử trong cột sắc ký. Để định danh các cấu tử đó, chúng ta phải được hỗ trợ bởi một phương pháp khác, ví dụ như sử dụng đầu dị hồng ngoại IR, đầu dò tử ngoại UV…
Sắc ký lỏng cao áp (HPLC) là một phương pháp phân tích sắc ký lỏng hiện đại, được sử dụng rộng rãi trong kỹ thuật phân tích để phân tích các chất có hàm lượng nhỏ như: vitamin, acid amin, độc tố của vi sinh vật, dư lượng thuốc trừ sâu trong thực phẩm…
Đặc điểm của hệ thống sắc ký lỏng cao áp
o Kích thước của cột sắc ký bé: chiều dài 10-25cm, đường kính 2-4mm.
o Kích thước hạt vật liệu nhồi rất bé 1-4µm.
o Do kích thước của hạt vật liệu nhồi rất bé nên tốc độ dòng chất lỏng đi trong cột rất chậm. Để tăng vận tốc của dòng chất lỏng người ta sử dụng hệ thống bơm cao áp (P = 100 – 400 bar), khi đó vận tốc dịng đạt giá trị khoảng 0,1-10 ml/phút.
o Thời gian phân tích mẫu khoảng 30 phút.
Sắc ký pha thuận (Normal - phase HPLC): là phương pháp sắc ký có pha động là dung mơi khơng phân cực như hexane, cịn pha tĩnh là các hạt chất mang bằng silicagel trên đó có gắn các gốc phân cực như -CN hoặc -NH2.
Sắc ký pha đảo (Reversed - phase HPLC): là phương pháp sắc ký có pha động là dung mơi phân cực như nước hoặc nước cùng với các dung môi phân cực khác như methanol hay acetonitrile, còn pha tĩnh là các hạt chất mang bằng silicagel trên đó có gắn các gốc không phân cực như octadecyl- hay octylsilane. Sơ đồ hệ thống thiết bị sắc ký lỏng cao áp
Hệ thống sắc ký sử dụng 1 pha động
1. Bình chứa pha động. 8. Kim bơm mẫu. 2. Bộ phận lọc pha động. 9. Bộ phận nạp mẫu.
3. Bơm cao áp. 10. Cột sắc ký.
4. Ống dẫn pha động. 11. Lò ổn nhiệt.
5. Flow splitter. 12. Đầu dò.
6. Đồng hồ áp suất. 13. Máy ghi kết quả.
7. Pre-column. 14. Bộ phận thu sản phẩm.