I 2+ 2OH 2 + H2O O
Vùng chứa tế bào VS
4.3.5 Phương pháp màng lọc (Membrane Filter Method)
Phương pháp màng lọc thường dùng để định lượng vi sinh vật (đặc biệt là vi sinh vật chỉ thị) trong mẫu nước khi làm các xét nghiệm môi trường (nơi có mật độ vi sinh vật nói chung và vi sinh vật chỉ thị nói riêng tương đối thấp). Bản chất của phương pháp này là tập trung số vi sinh vật ít ỏi trong một mẫu nước có khối lượng khá lớn trên màng lọc vi khuẩn và định lượng chúng theo số khuẩn lạc đếm được sau khi đặt màng lọc lên một mơi trường thạch có thành phần dinh dưỡng thích hợp cho loại vi sinh vật cần kiểm tra. Dựa trên khối lượng mẫu nước ban đầu và quy ước coi mỗi khuẩn lạc được hình thành từ 1 vi khuẩn từ đó quy ra số lượng vi sinh vật có trong một đơn vị thể tích nước.
Về thực chất đây là sự kết hợp của 2 phương pháp vốn được sử dụng rộng rãi trong công tác kiểm nghiệm vi sinh vật: phương pháp lọc vô khuẩn (thường dùng để thanh trùng một số dung dịch kém chịu nhiệt, dễ bị biến chất hoặc dễ bị phân hủy ở điều kiện nhiệt độ cao) và phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa.
Hiện nay người ta đã chế tạo được nhiều loại màng lọc khuẩn khác nhau với kích thước lỗ vào khoảng 0,2 – 1µm. Những vật liệu thường dùng để chế tạo màng lọc là sợi thủy
tinh, sợi amiante, sợi polypropylene… là những vật liệu chịu được nhiệt độ và áp suất cao của nồi hấp tiệt trùng. Màng lọc này thường được cung cấp trong trạng thái vô trùng.
Phương pháp màng lọc hiện nay vẫn không ngừng được cải tiến theo nhiều hướng khác nhau tùy theo u cầu sử dụng. Một ví dụ điển hình là phương pháp lọc qua màng kỵ nước (Hydrophobic Grid Membrane Filter Method). Ở đây, người ta dùng những màng lọc đã được in thành các ô vuông bằng một loại vật liệu kỵ nước. Những đường kẻ kỵ nước này có tác dụng ngăn cản sự mọc lan của các khuẩn lạc và như vậy có thể chia bề mặt màng lọc thành những ơ đều nhau có kích thước xác định. Số ơ có khuẩn lạc mọc được đếm và quy về số có xác suất lớn nhất (MPN) của lượng vi sinh vật có trong một thể tích mẫu theo cơng thức: x N N N MPN − = .ln Trong đó: N: tổng số các ơ vng. x: số ơ có khuẩn lạc mọc
CHƯƠNG 5