I 2+ 2OH 2 + H2O O
CÁC PHƯƠNG PHÁP KHÔNG TRUYỀN THỐNG TRONG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT
5.3.4.3 Hướng dẫn sử dụng
Sử dụng những dụng cụ vô trùng khi cầm đĩa Petrifilm. Tẩy trùng vùng làm việc bằng cách lau sạch với cồn hay các chất tẩy trùng khác trước và sau khi sử dụng. Những đĩa Petrifilm đã sử dụng có thể chứa các vi sinh vật do đó không mở đĩa khi không cần thiết.
Các bước chính:
B1. Nếu gói Petrifilm đang được giữ lạnh, để gói trở về nhiệt độ phòng trước khi mở. Bước này nhằm ngăn các giọt nước ngưng tụ bên ngoài gói dính vào đĩa. B2. Đặt đĩa Petrifilm trên mặt phẳng, mặt có lưới đếm ở phía dưới. Nhấc lớp máng trên lên.
B3: Dùng pipet thẳng hút 1ml mẫu cho vào giữa lớp màng dưới. Nếu cần, mẫu có thể được pha lỗng với nước cất, môi trường nuôi cấy lỏng hay đệm với pH khoảng 6,6 – 7,2. Nếu chất kháng sinh cần thêm vào thì thêm chúng vào dịch cấy với nồng độ thích hợp.
B4: Hạ từ từ lớp màng trên xuống màng dưới bắng cách cuốn trịn từ trong ra. Khơng để lớp màng trên rơi xuống.
B5.Đặt miếng căng spreader lên lớp màng trên tại vùng ủ giống. Chú ý để mặt bằng phẳng tiếp xúc với lớp màng trên, mặt có đường rìa tròn hướng lên.
B6. Ấn nhẹ nhàng lên miếng spreader để trải đều dịch cấy trên vòng tròn ủ. Không xoắn hay trượt miếng spreader.
B8. Ủ đĩa thành từng chồng 20 đĩa, mặt lưới đếm nằm dưới. Thời gian ủ và nhiệt độ khác nhau tuỳ mục đích và loại mẫu.
B9. Đếm các khuẩn lạc theo như phần giải thích.
B10. Những khuẩn lạc có thể được tách ra để nghiên cứu sâu hơn hoặc để cấy giống. Nhấc lớp màng trên lên và lấy khuẩn lạc từ những lớp gel. Môi trường sẽ dính chặt vào lớp màng trên.
Chú ý: không sử dụng những chất pha loãng chứa citrate hay natri thiosulfate bởi vì chúng có thể ngăn các sự phát triển của vi sinh vật trên đĩa petrifilm.