II. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu vật sinh học
3.1. Kết quả lây nhiễm truyền dọc
Trong các nghiên cứu trước trên tơm thẻ chân trắng và tơm he Trung Quốc, khi tơm bố mẹ mang virus IHHV thì phơi, trứng và các giai đoạn ấu trùng con của chúng điều mang virus. Ở nghiên cứu này, để đánh giá cĩ sự lây truyền IHHNV từ mẹ sang con con của tơm sú hay khơng. Kết quả nghiên cứu cho thấy con mẹ mang virus thì trứng và các con con của chúng cũng mang virus. Trong 100 con mẹ, qua sàng lọc bằng kỹ thuật PCR, chúng tơi chọn 6 mẹ nhiễm IHHNV để cho sinh sản. Trong nghiệm thức 6 con mẹ mang trứng đã giao vĩ xác định nhiễm IHHNV được nuơi chung và sau đĩ cắt mắt để cho đẻ. Trứng sau khi đẻ sẽ được thu mà chuyển qua bể ương, trứng mỗi con mẹ sẽ được ương trong từng bể riêng biệt. Mỗi giai đoạn biệt hĩa từ trứng sẽ cho đến ấu trùng PL6 sẽ được thu cho vào từng lọ cĩ kí hiệu riêng biệt và kiểm tra sự hiện diện IHHHNV. Đối với 2 con mẹ khơng nhiễm IHHNV cũng được bố trí đồng thời, cách xa nhĩm bệnh và cho sinh sản như nhĩm tơm mẹ mang mầm bệnh
Kết quả phân tích PCR cho thấy ở nhĩm lây nhiễm, tất cả các trường hợp tơm mẹ nhiễm IHHNV đều truyền IHHNV cho trứng và các giai đoạn sau của chúng. Ở nhĩm đối chứng tơm mẹ khơng nhiễm IHHNV sẽ cho kết quả trứng và các giai đoạn sau đĩ của nĩ khơng bị nhiễm IHHNV.
103
TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - 3 - THÁNG 6/2014
Hình 1 . Kiểm tra PCR phát hiện trên mẫu tơm mẹ nhiễm IHHNV và các giai đoạn ấu trùng nhiễm virus
Sự lan truyền IHHNV từ mẹ sang con của chúng thơng qua các cá thể tơm sú mẹ khơng nhiễm IHHNV và bị nhiễm IHHNV đã được nghiên cứu. Trong đĩ, 2 cá thể tơm mẹ (kí hiệu S2 và S9) khơng nhiễm IHHNV làm thành nhĩm đối chứng và 6 cá thể tơm
mẹ (kí hiệu S3, S4, S5, S6, S8 và S12) nhiễm IHHNV sẽ được xếp vào nhĩm lây nhiễm. Sau khi tơm mẹ đẻ, trứng và các giai đoạn ấu trùng của chúng sẽ được thu và phân tích bằng phương pháp PCR. Kết quả thể hiện ở bảng 1.
Bảng 1. Kết quả phân tích PCR các mẫu trứng và giai đoạn ấu trùng thu từ các cá thể tơm mẹ nhiễm và khơng nhiễm IHHNV
Giai đoạn Đối chứng Nhĩm lây nhiễm
Mẹ S2 Mẹ S9 Mẹ S3 Mẹ S4 Mẹ S5 Mẹ S6 Mẹ S8 Mẹ S12 Trứng (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Nauplii 1 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Nauplii 2 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Nauplii3 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Zoea 1 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Zoea 2 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Zoea 3 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Mysis 1 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Mysis 2 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) Mysis 3 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) PL 1 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) PL 2 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) PL 3 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) PL 4 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) PL 5 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) PL 6 (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+)
104 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - 3 - THÁNG 6/2014
Kết quả phân tích PCR cho thấy ở nhĩm lây nhiễm, tất cả các trường hợp tơm mẹ nhiễm IHHNV đều truyền IHHNV cho trứng và các giai đoạn sau của chúng. Ở nhĩm đối chứng tơm mẹ khơng nhiễm IHHNV sẽ cho kết quả trứng và các giai đoạn sau đĩ của nĩ khơng bị nhiễm IHHNV.