II. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu vật sinh học
106 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG 3 THÁNG 6/20143.5 Biểu hiện bệnh tích sau khi lây nhiễm
3.5. Biểu hiện bệnh tích sau khi lây nhiễm
Tơm sau khi lây nhiễm, chỉ ghi nhận được cĩ mợt số con mang virus cĩ biểu hiện màu sắc khác thường so với bể đối chứng.
Hình 4. Quan sát, biểu hiện hình thái của tơm sau khi lây nhiễm 2 tuần. (A) Tơm trong bể lây nhiễm; (B) Tơm trong bể lây nhiễm (mũi tên) và trong bể đối chứng.
IV. THẢO LUẬN
Sự lây truyền của IHHNV từ bố mẹ sang thế hệ con trên tơm thẻ chân trắng và P.
chinesis đã được nghiên cứu và chứng minh,
IHHNV lan truyền từ mẹ sang con (Motte và ctv., 2003; Zhag và ctv., 1997). Tuy nhiên ở Việt Nam, trên tơm sú nuơi chưa thấy cĩ sự tác đợng lớn của IHHNV. Các nghiên cứu chủ yếu tập trung trên bệnh đốm trắng, bệnh cịi. Đồng thời, chưa cĩ nghiên cứu cơ bản nào về việc truyền lan của IHHNV trên tơm sú nuơi ở Việt Nam, để làm rõ hơn sự lây truyền của virus này trên tơm sú nuơi ở ĐBSCL từ đĩ nhằm đưa ra các giải pháp hạn chế sự lan truyền của chúng trong tơm nuơi ở nước ta. Ở nghiên cứu này, ở nhĩm tơm mẹ đã giao vĩ bị nhiễm IHHNV cho đẻ, trứng của chúng và các giai đoạn ấu trùng khi được kiểm tra bằng PCR. Kết quả cho thấy cĩ sự lây truyền từ IHHNV trên tơm sú mẹ mang IHHNV sang con con thơng qua trứng và các giai đoạn phát triển của ấu trùng potlavae 6 ở bảng 1 đã được chứng minh. Ở nhĩm mẹ âm tính IHHNV khi phân tích bằng PCR, trứng và con con của chúng đều âm. Kết quả này cho thấy, nguồn nước bể ương và quá trình
cho sinh sản và ương nuơi khơng cĩ sự lây truyền ngang IHHNV. Lây truyền theo chiều dọc cĩ thể đã gĩp phần đáng kể vào sự lây lan nhanh chĩng của IHHNV trong hệ thống nuơi trồng thuỷ sản và đĩng mợt vai trị quan trọng gây bùng phát dịch do IHHNV ở đàn tơm hoang dã trong tự nhiên. Lây truyền từ mẹ sang con giúp virus phát tán trong hệ thống ương, sau đĩ lây nhiễm sang ấu trùng khi chúng bắt đầu ăn hoặc lan truyền từ trứng sang ấu trùng (Lotz, 1997). Ở kết quả bảng 1, đã xác định được khi tơm sú mẹ nhiễm thì thế hệ con của chúng cũng bị nhiễm. Kết quả này cũng giống như kết quả nghiên cứu trước đĩ ở tơm sú, tơm thẻ chân trắng và tơm Fenneropeneaus chinesis chứng minh
rằng IHHNV lây truyền theo chiều dọc cĩ thể được truyền từ bố mẹ cho con cháu của chúng thơng qua sự hiện diện của virus trên buồng trứng, đến trứng và các thế hệ con (Withuyachumnarnkul và ctv., 2006; Motte và ctv., 2003; Zhang và Sun., 1997).
Lây truyền ngang của IHHNV được biết là bằng con đường tơm ăn thịt xác vật chủ bị nhiễm bệnh, tiếp xúc trực tiếp giữa tơm bệnh và khơng bệnh hoặc tiếp xúc gián tiếp thơng
107
TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - 3 - THÁNG 6/2014
qua nước. Khi xảy ra dịch bệnh, hiện tượng tơm ăn lẫn nhau được xem như là con đường lây nhiễm nhanh và hiệu quả nhất trong tự nhiên (Lightner và ctv.,1983; Bell và Lightner, 1984). IHHNV khi nhiễm trên tơm sú hoặc tơm thẻ thì khơng gây chết chỉ gây chết trên tơm xanh. Trong nghiên cứu này, sau khi lây nhiễm IHHNV, tơm khơng bị chết bởi virus, mà chỉ biểu hiện thay sắc tố, nhưng khơng rõ ràng. Đây là cơ sở để nghiên cứu và hiểu rõ vể bản chất của virus lây truyền tự nhiên nhằm nghiên cứu các quần đàn tơm cĩ mang virus mà khơng biểu hiện bệnh, những lồi tơm kháng IHHNV hoặc giai đoạn sớm của tơm đã mang mầm bệnh virus lây truyền qua những lồi tơm nhạy cảm hơn theo giai đoạn sống bằng cách thơng qua các thí nghiệm lây truyền cho ăn tơm bệnh và sống chung. Phân tích tỷ lệ nhiễm IHHNV sau 2 tuần và 4 tuần lây nhiễm cho thấy tỷ lệ nhiễm ở các nghiệm thức điều tăng lên rõ rệt. Ở nghiệm thức sống chung và sống chung kết hợp ăn bệnh phẩm 5 ngày tỷ nhiễm lệ đạt cao trên 70%, sự gia tăng tỷ lệ nhiễm chứng tỏ virus nhân lên và cĩ sự lây lan rõ rệt. Tương tự như nghiệm thức 2 cho tơm ăn mẫu bệnh phẩm 5 ngày liên tiếp, mặc dù ở 2 tuần kiểm tra sự hiện diện virus trong tơm lây nhiễm IHHNV thấp (46,67%) và ở 4 tuần tỷ lệ nhiễm lên đến 60,0 %. Trong phần thảo luận tránh lặp lại chi tiết các kết quả. Kết quả trên cũng cho thấy, cĩ sự lây lan của virus trong quần đàn tơm sú. Trong kết quả nghiên cứu về IHNNV nhân sinh của virus bằng cách tiêm, sự nhân sinh của virus rất chậm trên tơm lây nhiễm, cịn tùy thuợc vào điều kiện nhiệt đợ cũng như thời gian (Montgomery-Brock và ctv., 2007; Galván- Alvarez và ctv., 2012). Ở nhiệt đợ thường 28-300C, thời gian nhân sinh virus trong tơm thẻ chân trắng cao nhất khoảng 17-21 ngày. Vì vậy, trong thí nghiệm lây nhiễm này, tỷ lệ phát hiện của IHHNV trong trong 4 tuần cao hơn 2 tuần ở tất cả các nghiệm thức là điều phù hợp với nghiên cứu trước đĩ. Điều này
cho thấy khi lây nhiễm bằng con đường ăn và sống chung với tơm mang virus, virus cần phải cĩ mợt thời gian để thích nghi và tương tác với tế bào chủ. Chúng phải cĩ thời gian vượt qua hệ thống miễn dịch của tơm, đồng thời tăng cường sự nhân lên bợ gen của virus trong tế bào chủ. Vì vậy, trong giai đoạn 2 tuần đầu tỷ lệ nhiễm virus tùy thuợc vào mức đợ virus đưa vào và sự ổn định của chúng khi xâm nhiễm vào tế bào chủ. Mợt số nghiên cứu cho rằng tơm sú nhiễm IHHNV ngồi tự nhiên cĩ thể bị cịi cọc, chậm lớn, dị hình và màu sắc tơm sú thay đổi thành màu xanh lơ nước biển (Rai và ctv., 2009). Ở nghiên cứu này, chúng tơi nhận thấy tơm sau 2 tuần lây nhiễm mợt số tơm cĩ thay đổi về màu sắc, khơng cĩ biến đổi về hình thái như phân đàn hay dị dạng như tơm sú ở ngồi tự nhiên nhiễm IHHNV. Kết quả này cũng giống như những nghiên cứu của Withyachumnarnkul và ctv. (2006).
Hiện nay, khơng chỉ ở Việt Nam mà cịn nhiều quốc gia trên thế giới đang cĩ xu hướng nhập giống ngoại lai để nuơi nhằm tăng cao sản lượng cũng như tránh rủi ro bởi các loại bệnh mà giống địa phương đang gặp phải. Trong những năm trở lại đây, ngồi đàn tơm sú hiện cĩ, tơm thẻ chân trắng được đưa vào nuơi trên những địa phương gia tăng mợt cách nhanh chĩng và đại trà. Những nghiên cứu gần đây cho thấy, sự lây truyền giữa những bệnh ngoại lai như LOVV (Lymphoid organ vacuolization virus) từ tơm thẻ sang tơm sú, sự hiện diện của virus này cĩ thể là nguyên nhân gây bệnh chậm lớn trên tơm sú. Hoặc bệnh đục cơ do MrNV và XSV từ tơm càng xanh nhiễm qua tơm sú và Penaeus (Fenneropenaeus) indicus kết quả là tơm bị chết rất nhiều do
đục cơ (Flegel., 2012). Cho đến nay, chưa cĩ mợt nghiên cứu nào nĩi về vật chủ trung gian truyền lây của IHHNV trên tơm sú được biết đến. Vì vậy để hiểu rõ sự lan truyền virus từ tơm thẻ chân trắng sang tơm sú, từ đĩ để cĩ cách phịng trị kịp thời, tiến hành thiết kế thí nghiệm dựa trên 2 quần đàn tơm sú và tơm
108 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - 3 - THÁNG 6/2014
thẻ chân trắng đã được kiểm tra sự hiện diện của IHHNV bằng kỹ thuật PCR. Kết quả thí nghiệm đã chứng minh được cĩ sự lây truyền dọc từ mẹ sang con, khi con tơm sú mẹ nhiễm IHHNV thì trứng và con con của chúng cũng nhiễm IHHNV. Cũng như chứng minh được sự lây truyền ngang cùng lồi và khác lồi trong quần đàn, khi tơm sú sống chung với tơm thẻ và ăn tơm thẻ nhiễm IHHNV thì tơm sú cũng nhiễm virus này sau 2 tuần lây nhiễm. Tơm sú nhiễm virus sau 2 tuần lây nhiễm cĩ thể trên 50% nếu sống chung và ăn tơm nhiễm virus. Từ kết quả này làm cơ sở bước đầu cho nghiên cứu và cĩ biện pháp phịng trị sự lây truyền IHHNV trong tơm nuơi.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
Gudkovs, N., 2008. Tài liệu thực hành phịng thí nghiệm, thuợc dự án “Nâng cao năng lực các phịng xét nghiệm virus trên tơm ở Việt Nam” của ACIAR, Úc phối hợp với Bợ NN & PTNT và ĐH Cần Thơ, Việt Nam thực hiện.
Đặng Thị Hồng Oanh và Nguyễn Thanh Phương, 2012. Các bệnh nguy hiểm trên tơm nuơi ở Đồng bằng sơng Cửu Long. Tạp chí Khoa học, Đại học Cần Thơ, tập 22c, trang 106-118.
Phạm Văn Hùng, Nguyễn Tẫn Bình, Nguyễn Đăng Ninh, Phạm Hùng Vân, Phạm Thành Hổ, 2009. Sự phổ biến của virus gây bệnh hoại tử dưới vỏ và cơ quan tạo máu trên tơm sú nuơi tại Việt Nam. Tạp chí Y Học TP. Hồ Chí Minh, tập 13 (2), trang 234-238.
Ngơ Xuân Tuyến, 2010. Điều tra phát hiện bệnh hoại tử cơ trên tơm thẻ chân trắng Penaeus vannamei do virus IMNV gây ra tại Việt Nam. Báo cáo đề tài nghiên cứu cấp cơ sở, Viện Nghiên cứu Nuơi trồng Thủy sản 2, 54 trang.
Tài liệu tiếng Anh
Bell, T.A., and Lightner, D.V., 1984. IHHN virus: Infectivity and pathogenicity studies in Penaeus
stylirostris and Penaeus vannamei. Aquaculture
38, 185-194.
Braz, R.F.S., Silva, C.P.R.O., Reis, L.G.,, Martins, P.C.C., Sales, M.P., Meissner, R.V., 2009. Prevalence of infectious hypodermal and hemato- poietic necrosis virus (IHHNV) in Penaeus
vannamei cultured in Northeastern Brazil.
Aquaculture 288, 143–6.
Chayaburakul, K., Lightner, D.V., Sriurairattana, S., Nelson, K.T., and B. Withyachumnarnkul, 2005. Different responses to infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) in
Penaeus monodon and Penaeus vannamei. Dis.
Aquat. Org., 67:191-200.
Dhar, A.K., Roux, M.M., Klimpel, K.R., 2001. Detection and quantification of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus and white spot virus in shrimp using real-time quantitative PCR and SYBR green chemistry. J. Clin. Microbiol. Aug. 39 (8), 2835–2845.
Flegel, T.W., 1997. Special Topic Review: Major viral diseases of the black tiger prawn (Penaeus
monodon) in Thailand. World Journal of
Microbiology and Biotechnology 13, 433-442. Flegel, T.W., 2012 Minireview: Historic emergence,
impact and current status of shrimp pathogens in Asia, J Invertebr Pathol 110, 166-73.
Galván-Alvarez, D, Mendoza-Cano, F, Hernández- -Lĩpez, J., Sánchez-Paz, A., 2012. Experimental evidence of metabolic disturbance in the white shrimp Penaeus vannamei induced by the
Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus (IHHNV). Journal of Invertebrate Pathology 111, 60–67.
Lightner, D.V., Redman, R.M., Bell, T.A., Brock, J.A., 1983. Detection of IHHN virus in Penaeus
stylirostris and Penaeus vannamei imported into
Hawaii. J. World Maricult. Soc 14, 212-225 Lotz, J.M., 1997. Special topic review: viruses,
biosecurity and specific pathogen-free stocks in shrimp aquaculture. World J Microbiol Biotechnol 13, 405–13.
Montgomery-Brock, D., Tacon, A.G.J., Poulos, B., & Lightner, D.V., 2007. Reduced replication of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis
109
TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - 3 - THÁNG 6/2014
virus (IHHNV) in Litopenaeus vannamei held in warm water. Aquaculture 265, 41–48.
Motte, E., Yugcha, E., Luzardo, O.J., Castro, F., Le- clercq, G., Rodrisguezj, J., Miranda, P., Borja, O., Serrano, J., Terreros, M., Montalvo, K., Narva- sez, A., Tenorio, N., Cedno, V., Mialhe, E., and Boulo, V., 2003. Prevention of IHHNV vertical transmission in the white shrimp Litopenaeus vannamei. Aquaculture 219, 57–70.
Primavera, J.H., Quinitio, E.T., 2000. Runt-deformity syndrome in cultures of the giant tiger prawn Penaeus monodon. J. Crust. Biol. 20, 796–802. Rhode, S.L., 1985. Trans-activation of parvovirus P38 promoter by the 76K nucelocapsid protein. J. Virol 55, 886–889.
Rai, P., Safeena, M,P., Karunasagar, I., Karunasagar, I., 2009. Simultaneous presence of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) and Type A virus-related sequence in
Penaeus monodon from India. Aquaculture 295, 168–174.
Tang, K.F.J., Poulos, B.T., Wang, J., Redman, R.M., Shih, H.H., & Lightner, D.V., 2003. Geographic variations among infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) isolates and characteristics of their infection. Dis. Aquat. Org 53, 91–99.
Walker, P.J., and Winton, J.R., 2010. Review: Emerging viral diseases of fish and shrimp. Vet. Res 41, 51. Withyachumnarnkul, B., Chayaburakul, K., Supak,
L.A., Plodpai, P., Sritunyalucksana, K., Nash, G., 2006. Low impact of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) on growth and reproductive performance of Penaeus
monodon, Dis. Aquat. Org 69, 129–136.
Zhang, J.X., Sun, X.Q., 1997. A preliminary study on the virus in the eggs of Penaeus chinensis. Oceanogr. Huanghai and Bohai Seas 15 (1), 48–51.
110 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - 3 - THÁNG 6/2014