- Kỹ thuật ELISA Sandwich
3.2.2.Tạo dũng plasmit tỏi tổ hợp mang gen mó húa protein gp
KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC
3.2.2.Tạo dũng plasmit tỏi tổ hợp mang gen mó húa protein gp
Sau khi khuếch đại được đoạn gen mó húa protein gp120, chỳng tụi tiến hành tạo dũng plasmit tỏi tổ hợp mang đoạn gen này. Để tạo ra plasmit tỏi tổ hợp, chỳng tụi tiến hành phản ứng gắn đoạn gen mó húa protein gp120 đó được khuếch đại bằng phản ứng Nested-PCR vào vectơ pCRđ2.1.
1500 bp 1 2 3 1 2 3
82
Plasmit tỏi tổ hợp sau đú được biến nạp vào tế bào E. coli để lựa chọn
được dũng plasmit mang gen gp120. Chọn cỏc dũng plasmid dự đoỏn cú
mang gen mó hoỏ protein gp120 để tiến hành xử lý với enzym giới hạn
EcoRI. Kết quả phõn tớch sản phẩm cắt plasmid tỏi tổ hợp trờn gel agarose 1%
cho thấy: plasmid đó được cắt bằng enzyme giới hạn và văng ra một đoạn
DNA cú kớch thước đỳng bằng kớch thước của sản phẩm PCR gen gp120
(khoảng 1472 bp). Như vậy, cỏc dũng plasmid tỏi tổ hợp mang gen gp120 cú khả năng đó được thu nhận.
Để khẳng định kết quả tạo dũng gen mó hoỏ protein gp120 của virus
HIV, chỳng tụi tiến hành tinh sạch cỏc dũng plasmid tỏi tổ hợp và tiến hành xỏc định trỡnh tự gen. Kết quả giải trỡnh tự gen gp120 phõn type CRF01_AE:
6 7 8 9 10 1375 bp 1375 bp 1584 bp ~1472 bp 1 2 3 4 5 A B C
Hỡnh 3.5. Kết quả tạo dũng gen mó húa protein GP120
A: Kiểm tra sơ bộ plasmid được tỏch chiết từ thể biến nạp trờn gel agarose 1%; B: Kiểm tra sự cú mặt của gen gp120 trong pCR2.1-gp120 bằng enzym
EcoR I; C: Kiểm tra sản phẩm plasmit tinh sạch trờn gel agarose 1%. 1-4:
DNA plasmid tỏch từ cỏc khuẩn lạc trắng; 5: DNA plasmid pCRđ 2.1 tỏch từ khuẩn lạc xanh; 6: thang DNA chuẩn; 7: gen gp120 được khuếch đại bằng
Nested PCR; 8-10: cỏc dũng plasmid số 2, 3, 4 được xử lý bằng enzyme
83