Đõy là phương phỏp cho phộp khuếch đại và xỏc định số lượng cỏc
chuỗi DNA được tạo ra trong từng chu kỳ nhiệt. Sau mỗi chu kỳ nhiệt, số lượng cỏc bản sao DNA được tổng hợp tăng lờn sẽ cho cỏc tớn hiệu phỏt quang tăng tỷ lệ thuận. Dựa vào một gam mẫu chuẩn cú số lượng DNA đớch xỏc định tiến hành đồng thời cựng mẫu thử để xõy dựng một đường chuẩn dựa trờn số liệu bản sao DNA đớch và giỏ trị Ct của từng mẫu tương ứng (Ct là thời điểm ở chu kỳ n của PCR cho tớn hiệu huỳnh quang tăng vọt so với tớn
hiệu nền). Nếu số lượng DNA bản đớch càng lớn thỡ Ct càng nhỏ. Cú nhiều
phương phỏp sử dụng phộp phỏt quang để xỏc định số lượng bản sao DNA
được nhõn lờn. Thụng thường người ta thường dựng: SYBR Green 1 hoặc
mẫu dũ đặc hiệu.
1.10.4. Phỏt hiện giỏn tiếp sự cú mặt của HIV
Cỏc kỹ thuật phỏt hiện giỏn tiếp sự cú mặt của HIV thụng qua cỏc thành phần
đặc hiệu khỏng lại cỏc thành phần cấu trỳc của virus [2].
+ Kỹ thuật ngưng kết (agglutination)
Kỹ thuật này dựa trờn nguyờn lý ngưng kết thụ động, những hạt như
gelatin (SERODIA test), latex hoặc hồng cầu người làm giỏ đỡ cho cỏc protein virus. Khi cho tiếp xỳc với KT khỏng HIV, cỏc hạt này tạo thành một mạng lưới ngưng kết cú thể nhận định bằng mắt thường.
35
Đõy là kỹ thuật đơn giản, nhanh, khụng đũi hỏi trang bị cao cú thể tiến
hành hàng loạt nờn cú ý nghĩa điều tra dịch tễ, sàng lọc mỏu tuy nhiờn cú phản
ứng dương tớnh giả.
+ Kỹ thuật miễn dịch enzyme pha rắn ELISA
ELISA là phương phỏp cho phộp phỏt hiện hầu hết cỏc mẫu xột nghiệm cú KT khỏng HIV. Tuy nhiờn, đõy là phương phỏp cú độ nhạy cao, do đú cú thể cho những kết quả dương tớnh giả. Để hạn chế nguy cơ này, cần phải cú phương phỏp kết hợp để khẳng định chẩn đoỏn của ELISA. Western Blot
(WB) là phương phỏp hỗ trợ phổ biến nhất để khẳng định kết quả dương tớnh
của ELISA, IFA cũng được dựng như một phương phỏp thay thế cho WB. ELISA được ứng dụng để phỏt hiện cỏc KT IgG anti-HIV, IgA anti-
HIV hoặc IgM anti-HIV bằng 3 kỹ thuật sau: