- Kỹ thuật ELISA Sandwich
3.4.4.Nghiờn cứu khả năng phản ứng của GP120 tỏi tổ hợp với khỏng thể khỏng HIV trong huyết thanh bệnh nhõn HIV bằng Western blot
KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC
3.4.4.Nghiờn cứu khả năng phản ứng của GP120 tỏi tổ hợp với khỏng thể khỏng HIV trong huyết thanh bệnh nhõn HIV bằng Western blot
khỏng HIV trong huyết thanh bệnh nhõn HIV bằng Western blot
Để cú thể sử dụng gp120 tỏi tổ hợp làm nguyờn liệu cho việc phỏt triển
bộ kit chẩn đoỏn HIV, trước tiờn phải kiểm tra xem liệu sau khi biểu hiện và làm hồi tớnh protein tỏi tổ hợp cú thể nhận biết được khỏng thể khỏng lại HIV tự nhiờn hay khụng. Chỳng tụi đó kiểm tra mức độ phản ứng của GP120 tỏi tổ hợp với khỏng thể khỏng HIV tự nhiờn trong huyết thanh bệnh nhõn HIV bằng kỹ thuật Western blot. Kết quả cho thấy protein tỏi tổ hợp GP120 phản
ứng rất đặc hiệu với khỏng thể khỏng HIV tự nhiờn trong huyết thanh bệnh
nhõn HIV dương tớnh và hoàn toàn khụng phản ứng với huyết thanh bệnh
nhõn HIV õm tớnh (hỡnh 3.12.).
Hỡnh 3.12. Phỏt hiện khỏng thể khỏng HIV tự nhiờn trong huyết thanh bệnh
nhõn bằng Western blot. A: Phản ứng giữa protein tỏi tổ hợp GP120 với huyết thanh dương tớnh với HIV, B: Phản ứng giữa protein tỏi tổ hợp GP120 với
huyết thanh õm tớnh với HIV, 1: Thang protein chuẩn (Fermentas), 2: Protein tỏi tổ hợp GP120, 3: Protein tỏi tổ hợp Thioredoxin.
kDa 55 40 35 25 15 1 2 3 1 2 3 A B
92
Như trỡnh bày ở trờn, GP120 tỏi tổ hợp được biểu hiện dưới dạng dung hợp cú gắn thờm Thioredoxin ở đầu N, vỡ vậy chỳng tụi sử dụng protein
Thioredoxin làm đối chứng để xỏc định tớnh đặc hiệu của phản ứng khỏng
nguyờn – khỏng thể giữa GP120 tỏi tổ hợp và khỏng thể khỏng HIV tự nhiờn. Kết quả nghiờn cứu cho thấy khỏng nguyờn tỏi tổ hợp Thioredoxin hoàn toàn khụng phản ứng với khỏng thể trong cỏc mẫu huyết thanh xột nghiệm (hỡnh 3.12.). Kết quả này núi lờn rằng sau khi tinh chế GP120 tỏi tổ hợp vẫn bảo tồn
nguyờn vẹn được tớnh khỏng nguyờn và phản ứng đặc hiệu với khỏng thể
khỏng lại chỳng trong cỏc mẫu huyết thanh bệnh nhõn HIV.