- Kỹ thuật ELISA Sandwich
KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC
3.8. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU CHẾ TẠO BỘ KIT NGƯNG KẾT HẠT LATEX CHẨN ĐOÁN H
LATEX CHẨN ĐOÁN HIV
Sau khi cú cỏc khỏng nguyờn tỏi tổ hợp p24, gp41 và gp120, chỳng tụi
đó sử dụng cỏc khỏng nguyờn này gắn vào hạt latex để chế tạo bộ kit chẩn đoỏn nhanh và sàng lọc HIV. Sử dụng hạt polystyren kớch thước trung bỡnh
của hạt là 1,1 àm để gắn khỏng nguyờn. Hạt và kit gắn đều của hóng Bangs
Laboratories. Khi gắn khỏng nguyờn vào hạt đũi hỏi khỏng nguyờn phải cú
nồng độ protein cao (500 àg), vỡ vậy sau khi tinh chế khụng nờn hộn chung cỏc phõn đoạn mà nờn chọn cỏc phõn đoạn cú nồng độ protein cao để chế tạo kit ngưng kết hạt latex. Cỏc phõn đoạn cú nồng độ protein thấp hơn cú thể được sử dụng cho mục đớch khỏc.
Sau khi chế tạo, kit cũng được kiểm tra độ nhạy và độ đặc hiệu với cỏc mẫu huyết thanh bệnh nhõn. Kết quả kiểm tra cho thấy bộ kit cú độ nhạy và
độ đặc hiệu chấp nhận được trong sàng lọc cỏc mẫu HIV. Kiểm tra khả năng
Hỡnh 3.21. Bộ kit Dot blot
chẩn đoỏn HIV của viện
105
phản ứng đặc hiệu của hạt latex gắn cỏc khỏng nguyờn HIV tỏi tổ hợp được phản ỏnh ở hỡnh 3.22.
Hỡnh 3.22. Ảnh chụp dưới kớnh hiển vi sự ngưng kết của phức hợp hạt latex-
khỏng nguyờn-khỏng thể sau khi trộn huyết thanh bệnh nhõn HIV với huyền dịch hạt latex gắn khỏng nguyờn HIV. A: Mẫu huyết thanh õm tớnh với HIV, B: Mẫu huyết thanh dương tớnh với HIV.
Độ nhạy và độ đặc hiệu với 60 mẫu huyết thanh bệnh nhõn đó được xỏc định ở bảng 3.1. Kết quả cụ thể đối với kit ngưng kết hạt latex của viện Cụng
nghệ sinh học (IBT-HIV-Latex) được tớnh như sau:
Độ nhạy (SE %) = X 100 = X 100 = 97%
N: Tổng số mẫu xột nghiệm = 120
PA: Tổng số mẫu cho kết quả dương tớnh bằng Kit Latex của IBT (48) + số mẫu dương tớnh đó được khẳng định bởi 02 Kit (ELISA của Bio- Rad và DETERMINE của Abbott) (47) = 95
ND: Số mẫu cho kết quả õm tớnh giả ở kit Kit Latex của IBT = 3 N+: ND + PA = 3 + 95 = 98 PA N+ 95 98 A B
106
Độ đặc hiệu của bộ kit được tớnh theo cụng thức dưới đõy:
Độ đặc hiệu (SP %): SP = X 100% = X 100% = 89%
N: Tổng số mẫu xột nghiệm 120
NA: Tổng số mẫu cho kết quả õm tớnh bằng Kit Latex của IBT (12) + số mẫu õm tớnh đó được khẳng định bởi 02 Kit (ELISA của Bio-Rad và DETERMINE của Abbott) (13) = 25
PD: Số mẫu cho kết quả dương tớnh giả ở kit Kit Latex của IBT = 3 N-: NA + PD = 25 + 3 = 28