- Kỹ thuật ELISA Sandwich
2.2.9.Phương phỏp chiết ADN từ gel agarose
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.9.Phương phỏp chiết ADN từ gel agarose
Để cú thể thu nhận cỏc đoạn ADN sau khi đó cắt bằng cỏc enzyme hạn
chế phục vụ cho việc thiết kế cỏc vector biểu hiện, chỳng tụi dựng phương phỏp chiết ADN ra khỏi gel agarose sau khi điện di.
ADN được điện di trờn gel agarose sẽ phõn tỏch theo kớch thước. Mỗi
băng riờng biệt trờn một đường chạy tương ứng với một đoạn ADN cú kớch
thước nhất định. Vựng gel chứa đoạn ADN này được cắt rời ra khỏi bản gel
và thu nhận lại. Tiếp theo là cỏc bước xử lý để loại bỏ cỏc thành phần cấu thành gel và chỉ thu lại phần ADN chứa trong đú.
Quy trỡnh:
Sử dụng Kit Qiagen, cỏc bước tiến hành tuõn theo hướng dẫn sử dụng của sản phẩm.
56
- Cắt lấy băng ADN quan tõm, cho vào ống Eppendorf , sau đú cõn trọng lượng bằng cõn điện tử 10-4g.
- Bổ sung đệm QG (thể tớch đệm bổ sung gấp 3 lần khối lượng gel chứa băng ADN), sau đú ủ ở nhiệt độ 50oC trong 10 phỳt.
- Bổ sung isopropanol theo tỷ lệ 1:1. - Chuyển dịch lờn cột QIAGEN.
- Ly tõm 12.000 v/p trong 1 phỳt, loại bỏ dịch.
- Bổ sung 0,5ml đệm QG, sau đú ly tõm 12.000 v/p trong 1 phỳt. - Bỏ dịch, bổ sung 0,75ml đệm PE.
- Ly tõm 12.000 v/p trong 30 giõy, bỏ dịch. - Ly tõm cột với tốc độ 12.000 v/p trong 1 phỳt.
- Chuyển cột sang một ống Eppendorf mới, bổ sung 30ml nước khử
ion vụ trựng và giữ ở nhiệt độ phũng trong 3 phỳt.
- Ly tõm 12.000 v/p trong 1 phỳt, ADN được đẩy ra khỏi cột. - Điện di kiểm tra sản phẩm đó thu nhận trờn gel agarose 1%