- Kỹ thuật ELISA Sandwich
KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC
3.5.4. Kiểm tra khả năng phỏt hiện khỏng thể khỏng HIV trong huyết thanh bệnh nhõn bằng Western blot
thanh bệnh nhõn bằng Western blot
GP41 tinh sạch được kiểm tra tớnh khỏng nguyờn thụng qua phản ứng
giữa khỏng nguyờn với khỏng thể khỏng HIV trong huyết thanh bệnh nhõn nhiễm HIV theo mụ tả trong cụng trỡnh trước đõy (Kenealy, 1987). Theo kết quả nghiờn cứu dịch tễ học phõn tử của cỏc chủng HIV lưu hành tại Việt Nam của chỳng tụi (Bạch et al. 2009) và của cỏc tỏc giả khỏc (Lan et al., 2003, Liao et al., 2009), phõn type CRF01_AE là phõn type chủ yếu đang lưu hành tại Việt Nam chiếm trờn 97%, phõn type B chiếm khoảng 2-3%. Trong khi đú, tại Chõu Âu, Bắc Mỹ và hầu hết cỏc nước trờn thế giới thỡ phõn type CRF01_AE lại là phõn type chiếm một tỷ lệ rất nhỏ (2-3%). Do đú chỳng tụi
đặt ra giả thuyết liệu cỏc kit chẩn đoỏn cú nguồn gốc từ nước ngoài cú đặc
hiệu cho cỏc phõn type virus HIV đang lưu hành ở Việt Nam hay khụng? Để trả lời cho cõu hỏi này bước đầu chỳng tụi thăm dũ khả năng phản ứng giữa
khỏng nguyờn GP41 tỏi tổ hợp vừa được tạo ra (phõn lập từ phõn type
CRF01_AE) với khỏng thể khỏng lại chỳng cú nguồn gốc từ 2 phõn type khỏc nhau là HIV phõn type CRF01_AE và phõn type B. Kết quả Western blot cho thấy, GP41 tỏi tổ hợp phản ứng mạnh, đặc hiệu với khỏng thể khỏng HIV
phõn type CRF01_AE, thể hiện bởi băng phản ứng đậm trờn màng phản ứng (hỡnh 3.16). Kết quả này cũng cho thấy GP41 tỏi tổ hợp vẫn phản ứng với
khỏng thể khỏng HIV phõn type B, tuy nhiờn mức độ phản ứng yếu hơn so
với phản ứng của GP41 tỏi tổ hợp với khỏng thể cú nguồn gốc từ phõn type CRF01_AE. GP41 tỏi tổ hợp hoàn toàn khụng phản ứng với cỏc mẫu huyết
thanh lấy từ cỏc bệnh nhõn õm tớnh với HIV (hỡnh 3.16.). Kết quả này cho thấy GP41 tỏi tổ hợp biểu hiện ở vi khuẩn vẫn giữ được đặc tớnh khỏng
nguyờn của chỳng và phản ứng đặc hiệu với khỏng thể khỏng HIV trong cỏc mẫu huyết thanh bệnh nhõn HIV. Kết quả này cũng tương tự đối với khỏng
97
đoỏn HIV phự hợp và đặc hiệu cho mỗi phõn type là thực sự quan trọng và
cần thiết.
Hỡnh 3.16. Kết quả kiểm tra phản ứng giữa GP41 tỏi tổ hợp với khỏng thể
khỏng HIV từ cỏc mẫu huyết thanh bệnh nhõn. 1: huyết thanh từ bệnh nhõn HIV õm tớnh, 2: huyết thanh bệnh nhõn nhiễm HIV-1 thuộc phõn type B, 3: huyết thanh bệnh nhõn nhiễm HIV-1 thuộc phõn type CRF01_AE.