- Kỹ thuật ELISA Sandwich
KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC
TÀI KC04.20/06-10 BÁO CÁO TỔNG HỢP
76
cỏc vựng khỏc nhau, bao gồm Bangkok, Bắc Thỏi Lan, Đụng Nam Thỏi Lan và Nam Thỏi Lan, kết quả xỏc định phõn type cho thấy phõn typ CRF01_AE chiếm tới 97,3%, trong khi đú phõn type B chỉ chiếm 2,7%. Khụng phỏt hiện thấy cỏc phõn type khỏc. Bản đồ phõn bố của cỏc phõn typ HIV trờn thế giới [104] cũng cho thấy khu vực Đụng Nam Á là khu vực lưu hành chớnh của phõn type CRF01_AE (Hỡnh 3.2.)
Hỡnh 3.2. Sự phõn bố của cỏc phõn type HIV trờn thế giới. Khu vực Đụng Nam Á (màu hồng) là khu vực lưu hành chớnh của phõn type CRF01_AE và B [104].
Cỏc cặp primer được thiết kế đặc hiệu cho phõn type B và CRF01_AE trờn gen p24 và tiến hành xỏc định phõn typ bằng Nested PCR. Kết quả cho thấy cỏc mẫu cú kết quả dương tớnh với phõn type B thỡ hoàn toàn õm tớnh với phõn type CRF01_AE và ngược lại. Tất cả 240 mẫu bệnh phẩm đều dương tớnh với hai phõn type hoặc B hoặc CRF01_AE, khụng cú mẫu nào hoàn toàn õm tớnh. Như vậy, những cặp mồi mà chỳng tụi thiết kếđể tiến hành định type là rất đặc hiệu, khụng cú mẫu bệnh phẩm nào vừa dương tớnh với phõn type B lại vừa dương tớnh với phõn type CRF01_AE.
77
Hỡnh 3.3. Sản phẩm Nested PCR với cặp mồi của phõn type B và phõn type CRF01_AE. M: DNA marker. a1, a2, b1, b2; b5, b6; b9, b10; b13, b14: Sản phẩm PCR với cặp mồi của phõn type B. b3, b4; b7, b8; b11, b12; b15, b16: Sản phẩm PCR với cặp mồi của phõn type CRF01_AE.
Để khẳng định một cỏch chớnh xỏc, chỳng tụi tiến hành lựa chọn một số
mẫu để kiểm tra lại trỡnh tự. Kết quả giải trỡnh tự cho thấy xỏc định phõn type bằng kỹ thuật Nested PCR với cỏc cặp mồi đặc hiệu được thiết kế trờn những vựng gen đặc trưng cho mỗi phõn type là kỹ thuật cho kết quả chấp nhận
được, giỏ thành hạ, tiến hành nhanh và cú thể thực hiện được trờn số mẫu lớn. Kết quả giải trỡnh tự gen p24 của phõn type B:
ID HIV-1 subtype B p24 gene PRELIMINARY; DNA; 608 BP.