- Genom của virus gắn vào DNA của tế bào nhiễm virus và trở thành 1 tiền virus (provirus).
1.11. ĐIỀU TRỊ HIV/AIDS
- Cho tới nay, thế giới vẫn chưa cú vắc xin phũng chống HIV/AIDS.
- Phỏc đồ điều trị tớch cực HAART là phương phỏp điều trị mang lại lợi ớch cực kỳ to lớn cho những bệnh nhõn nhiễm HIV.
- Phương phỏp điều trị tốt nhất hiện nay là kết hợp 3 loại thuốc 2 loại thuộc dạng nucleotide analogue ức chế enzyme phiờn mó ngược (NARTIs) cộng với một loại thuốc hoặc là ức chế protease hoặc là ức chế enzyme phiờn mó ngược nhưng khụng thuộc dạng nucleotide (NNRTI).
12
CHƯƠNG II
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.1. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU 2.1.1. Đối tượng 2.1.1. Đối tượng
Đối tượng nghiờn cứu là 240 mẫu mỏu bệnh nhõn HIV của 13 tỉnh thành trong cả nước: Hà Nội, Hải Phũng, Quảng Ninh, Lào Cai, Sơn La, Nghệ An, Huế, Đà Nẵng, TP Hồ Chớ Minh, Cần Thơ, Đắc Lắc, Đắc Nụng, Kom Tum. Mỗi mẫu mỏu đều được tỏch huyết thanh và mỏu toàn phần để tỏch chiết DNA.
2.1.2. Cỏc sinh phẩm
- KIT tỏch dũng TA cloning (Invitrogen).
- KIT làm phản ứng xỏc định trỡnh tự BigDyeđ Terminator v3.1. - KIT tinh sạch plasmid - S.N.A.P.TM (Invitrogen).
- Kit tỏch chiết DNA từ gel agarose - S.N.A.P free UV (Invitrogen). - Cột Nikel chelating Resin (Invitrogen).
- Cộng hợp khỏng IgG người gắn HRP (Bio Rad). - Vector biểu hiện pET32a(+) của Novagen.
- Tế bào vi khuẩn E. coli làm vật chủ tỏch dũng cỏc chủng DH5α [end A1 rec A1 hsd R17 sup E44 gyp A96 thi-1 relA1 lac U169 (φ80 lacZM15)]
- Tế bào vi khuẩn E. coli làm vật chủ biểu hiện chủng BL21 (DE3) star [F omp hsd SB(rBmB)gal dcm (DE3) plysS(Caml)] .
- Cộng hợp khỏng IgG người gắn HRP (Bio Rad). - Hạt latex carboxyl húa (Bangs Laboratories Ldt).
- Kit gắn protein vào hạt latex carboxyl húa (Bangs Laboratories Ldt).
2.1.3. Hoỏ chất
Cỏc húa chất tinh khiết được sử dụng trong nghiờn cứu sinh học phõn tử của hóng Sigma, Merk, Invitrogen, Bio-Rad… bao gồm IPTG, Ethanol,
13
Acetat natri, Cao nấm men, Trypton, Chloroform, EDTA, Agarose, Natriclorua, Agar-bacter, Tris-HCL, SDS, MgCl2, Acrylamide, bis- Acrylamide, 4-chloronaphthol, Tween 20, Methanol, Gelatin, BSA, Skim milk, TMB (Tetramethylbenzidine), NaC03, NaHCO3, NaN3, NaCl, Na2HPO4.2H20, NaH2PO4.H20 v.v…
2.1.4. Dung dịch và mụi trường
+ Dung dịch tỏch chiết plasmid từ E. coli + Dung dịch dựng cho điện di ADN + Dung dịch dựng cho điện di protein + Dung dịch dựng cho Western blot + Cỏc dung dịch dựng cho ELISA
+ Mụi trường nuụi cấy E. Coli: Mụi trường LB (g/l):