- Kỹ thuật ELISA Sandwich
KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC
3.9. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU CHẾ TẠO BỘ KIT ELISA CHẨN ĐOÁN H
HIV
Một trong cỏc phương phỏp miễn dịch được sử dụng phổ biến trong
sàng lọc cỏc mẫu huyết thanh nghi nhiễm HIV là phương phỏp ELISA. Chỳng tụi đó sử dụng cỏc khỏng nguyờn HIV tỏi tổ hợp tinh chế p24, gp41 và gp120
để chế tạo bộ kit ELISA. Khỏng nguyờn được gắn vào bản polystyrene 96
giếng đỏy bằng chuyờn dụng dựng cho ELISA của hóng TiterTec. Lượng
khỏng nguyờn tinh chế được đưa vào bản là 250 ng/giếng cho mỗi khỏng
nguyờn. Sau khi gắn, bản được được kiểm tra độ nhạy, độ đặc hiệu và độ bền theo thời gian.
NA N- N-
25 28 28
Hỡnh 3.23. Bộ kit ngưng kết
hạt latex chẩn đoỏn HIV của
Viện Cụng nghệ sinh học (IBT-HIV-Latex)
107
Kiểm tra độ nhạy và độ đặc hiệu cũng được tiến hành với cỏc mẫu
huyết thanh bệnh nhõn nờu trong bảng 3.1.
Độ nhạy của bộ kit ELISA IBT được tớnh theo cụng thức dưới đõy: Độ nhạy (SE %) = X 100 = X 100 = 97%
N: Tổng số mẫu xột nghiệm = 120
PA: Tổng số mẫu cho kết quả dương tớnh bằng Kit ELISA của IBT (46) + số mẫu dương tớnh đó được khẳng định bởi 02 Kit (ELISA của Bio- Rad và DETERMINE của Abbott) (47) = 93
ND: Số mẫu cho kết quả õm tớnh giả ở kit Kit ELISA của IBT = 3 N+: ND + PA = 3 + 93 = 96
Độ đặc hiệu của bộ kit được tớnh theo cụng thức dưới đõy:
Độ đặc hiệu (SP %): SP = X 100% = X 100% = 93 %
N: Tổng số mẫu xột nghiệm 120
NA: Tổng số mẫu cho kết quả õm tớnh bằng Kit ELISA của IBT + số mẫu õm tớnh đó được khẳng định bởi 02 Kit (ELISA của Bio-Rad và
DETERMINE của Abbott) (27)
PD: Số mẫu cho kết quả dương tớnh giả ở kit Kit ELISA của IBT = 2 N-: NA + PD = 27 + 2 = 29 PA N+ 93 96 NA N- 27 29 Hỡnh 3.24. Bộ kit ELISA
chẩn đoỏn HIV của Viện Cụng nghệ sinh học
108