CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.8.3. Thử nghiệm "Quellung" xác định typ huyết thanh
- Nguyên lý: Phản ứng Quellung dương tính xảy ra khi kháng thể đặc hiệu loài gắn với thành phần polysaccharid của vỏ phế cầu, gây nên sự thay đổi chỉ số khúc xạ của vỏ khi ánh sáng chiếu vào mà ta nhìn thấy dễ dàng dưới dạng "phình vỏ".
- Trong nghiên cứu này thử nghiệm Quellung được thực hiện với 36 chủng chuẩn do CDC cung cấp.
- Nguyên vật liệu: Bộ kháng huyết thanh đặc hiệu typ huyết thanh; dung dịch xanh methylen 3%; canh thang BHI. Pipetman và đầu cơn; que trộn; lam kính, lamen; kính hiển vi quang học.
- Cách tiến hành:
+ Nuôi cấy chủng vi khuẩn S. pneumoniae cần định typ huyết thanh trong canh thang tăng sinh BHI từ 6-12 giờ để có canh khuẩn có độ đục khoảng 1-2 McFarland.
+ Trên mỗi lam kính, ghi mã chủng vi khuẩn cần thử nghiệm và khoanh 3 vòng tròn cho 3 phản ứng.
+ Dùng pipetman lấy 4μl canh khuẩn nhỏ lên mỗi vòng tròn của 3 vịng trịn trên lam kính cho 3 phản ứng.
+ Với mỗi phản ứng, lấy 4μl dung dịch xanh methylen nhỏ lên 1 vịng trịn trên lam kính.
+ Với mỗi phản ứng, lấy 4μl dung dịch kháng huyết thanh đặc hiệu typ nhỏ lên 1 vịng trịn trên lam kính.
+ Trộn đều các dung dịch bằng que trộn, thay mỗi que trộn cho 1 phản ứng, đậy lamen.
+ Quan sát hiện tượng phồng vỏ của vi khuẩn dưới kính hiển vi quang học có độ phóng đại 400X (40x10).
- Đọc kết quả: Dương tính: Xuất hiện hiện tượng phồng vỏ: Vỏ vi khuẩn phồng lên, biến dạng. Hình ảnh quan sát thấy là: Tế bào vi khuẩn bắt màu xanh đen, xung quanh tế bào có một quầng với đường viền sắc nét, đó là gờ ngồi của vỏ (do ánh sáng xuyên qua vỏ sáng hơn vùng tế bào phế cầu).
Âm tính Dương tính
Hình 2.6. Hình ảnh phồng vỏ của phế cầu độ phóng đại 400X [26]