này. Nó đơn giản, an toàn mà vẫn đảm bảo đợc độ chính xác. Phơng pháp này có mấy u điểm sau:
1) Trong lúc chuẩn bị các dạng thuốc để thử còn lẫn một số vi khuẩn khác, ống khâu sẽ giữ vi khuẩn không cho khuếch tán ra ngoài thạch dợc. khâu sẽ giữ vi khuẩn không cho khuếch tán ra ngoài thạch dợc.
khuếch tán vào thạch làm tủa pepton cũng nh thức ăn khác của vi khuẩn thí nghiệm. 3) Nếu ống nghiệm khâu đảm bảo tiêu chuẩn quy định, chỉ Phytoncid đợc thẩm thấu vào thạch, rồi ức chế sự phát triển hay tiêu diệt vi khuẩn. Cho vòng vô khuẩn to, nhỏ tuỳ thuộc tác dụng dợc lý mạnh hay yếu của Phytoncid.
34
a.2. Chuẩn bị nguyên liệu
Các dạng thuốc thử cần thí nghiệm
35Các loại vi khuẩn cần thử
Thạch: riêng về thạch vào hộp lồng, ta chuẩn bị 2 loại: thạch nền và thạch trắng.
+ Thạch nền: Đặc hơn thạch trắng, thờng là loại thạch kém phẩm chất hơn, đợc nấu trong môi trờng canh thang rất loãng. So với thạch trắng hàm lợng chất dinh d- ỡng có ở thạch nền rất ít. Thạch này, sau khi đã hấp thanh trùng, đung nóng, chẩy trở lại, tuỳ theo kích thớc của từng loại hộp lồng mà ta đổ:
Với đĩa V = 20cm ta đổ vào mỗi đĩa 25-30 ml thạch i = 10cm ta đổ vào mỗi đĩa 15ml thạch
= 8cm ta đổ vào khoảng 10 – 12ml thạch, chờ đông, bảo quản tủ lạnh dùng dần.
+ Thạch tráng (thạch mặt): Là thạch bảo đảm đúng, đủ thành phần các chất dinh dỡng để vi khuẩn phát triển nh: Huyết thanh, glucoza, các axit amin, vitamin... nếu nh vi khuẩn thí nghiệm yêu cầu, lắc đều thanh trùng, đun nóng chảy hết, để nguội 46-480C rồi cho vi khuẩn cần thử vào, lắc đều, chia các đĩa. Thờng cứ 25ml thạch tráng cho thêm 0,2 ml canh trùng thí nghiệm, sau khi cấy 24 giờ ở tủ ấm, lắc thật đều, chia cho từng đĩa, mỗi đĩa tuỳ theo kích thớc cho khoảng 3 -10ml thạch trắng có canh trùng. Tráng khắp mặt đĩa. Nh vậy trong từng đĩa sẽ có 2 lớp thạch: 36Lớp thạch nền: chắc hơn, dày hơn ở phía dới
37Lớp thạch mặt: mỏng hơn, lỏng hơn đã có vi khuẩn cần thử ở phía trên.
2mm (tức chân của khâu vừa chạm tới mặt của lớp thạch nền). Nhỏ thuốc thử kháng sinh vào. Để tủ lạnh 6 – 8giờ chờ cho chất kháng sinh thẫm thấu vào lớp thạch mặt, nhng vi khuẩn cha mọc.
Tiếp đó để tủ ấm 370C; khoảng 12 – 18 giờ sau, đọc kết quả.
Do đờng kính vòng vô khuẩn, là đờng kính đi qua tâm vòng tâm khâu, tới mép vòng vô khuẩn. Số lợng địa thạch yêu cầu đợc tính theo công thức:
X = AxB/C