Thời gian theo
dõi (ngày)
Môi trường nuôi trứng
NaCl NaOH Ca(OH)2
5% 10% 5% 10% 5% 10% 1 - 4 Phôi phát triển bình thường Phôi phát triển kém rồi chết Phôi phát triển kém rồi chết và chuyển sang màu đen
Vỏ trứng bị bào mòn, phôi chết và chuyển sang màu đen
Tế bào phôi bị teo, co cụm lại một bên Vỏ trứng bị bào mòn, tế bào phôi bị méo và co cụm 5 - 10 Hình thành ấu trùng Trứng nhạt màu dần Trứng nhạt màu dần và tan ra Trứng nhạt màu dần và tan ra Trứng nhạt màu và tan ra Trứng nhạt màu và tan ra 11 - 23 Nở thành ấu trùng L1 tồn tại 1 - 2 ngày - - - - - Chú thích: (-) là không thấy trứng
Trong các môi trường NaCl, NaOH và Ca(OH)2 có nồng độ khác nhau, cho thấy trứng G. doloresi có những biến đổi khác nhau.
- Trứng G. doloresi nuôi trong môi trường NaCl 5%, trứng vẫn phát triển đến giai đoạn nở thành ấu trùng L1, nhưng ấu trùng L1 hoạt động yếu và bị chết ngay sau khi nở từ 1-2 ngày. Nhưng nuôi trong môi trường NaCl ở nồng độ 10% từ ngày thứ nhất đến ngày thứ 4 thì thấy phôi phát triển kém rồi chết. Sang ngày thứ 5 trứng nhạt màu dần.
- Trứng G. doloresi nuôi trong môi trường NaOH ở nồng độ 5%, sau 4 ngày nuôi thấy phôi phát triển kém rồi chết và chuyển sang màu đen. Sang ngày thứ 5 đến ngày thứ 10 trứng nhạt màu dần và tan ra. Ở môi trường NaOH ở nồng độ 10%, sau 4 ngày nuôi thấy vỏ trứng bị bào mòn dần, phôi chết và chuyển sang màu đen. Sau đó trứng nhạt màu dần và bị tan ra.
- Trứng G. doloresi nuôi trong môi trường Ca(OH)2 ởnồngđộ 5% và 10% sau khi nuôi từ ngày thứ nhất đến ngày thứ 4, vỏ trứng bị bào mòn, các tế bào phôi ở trong trứng đã bị biến đổi, phôi co cụm lại dồn về một bên, trứng nhạt màu dần và bị tan ra.
Từ kết quả nghiên cứu, chúng tôi có nhận xét: NaOH nồng độ 10% và Ca(OH)2 nồng độ từ 5-10% là những hóa chất làm cho trứng G. doloresi bị phá hủy nhanh và không phát triển được. Đây là loại hóa chất thông dụng, rẻ tiền, dễ sử dụng, dễ tìm, không ảnh hưởng đến quá trình sinh trưởng, phát triển của vật nuôi và đời sống sinh hoạt con người. Vì vậy, cần phải tiếp tục nghiên cứu sâu hơn trong phương pháp sử dụng các loại hóa chất thông dụng này để phòng bệnh giun, sán nói chung và bệnh do G. doloresi ở lợn nói riêng.
Khi nghiên cứu về sức đề kháng của trứng giun đũa với các loại hóa chất thông dụng như NaOH, Ca(OH)2, Phạm Chức và cs. (1980) cho biết: nuôi trứng trong dung dịch NaOH 10% kết quả thấy lớp vỏ ngoài bị tan đi, trứng mất đi lớp sần sùi bên ngoài. Trứng G. doloresi có vỏ mỏng như trứng của một số loài giun tròn khác, sức đề kháng đối với các loại hóa chất yếu dễ bị phá hủy nhanh hơn so với trứng giun đũa. Như vậy kết quả nghiên cứu của chúng tôi khá phù hợp với nghiên cứu của tác giả nêu trên.
Hình 4.22. Trứng G. doloresi sau 6 ngàynuôi trong môi trường NaCl 5%, phôi phát triển thành hình ấu trùng ở trong trứng (x100)
Hình 4.23. Trong môi trường NaCl 5%,ấu trùng G. doloresi sau khi nở ra hoạt động yếu (x100)
Hình 4.24. Trứng G. doloresi sau 4 ngày nuôi trong môi trường NaOH 10%, vỏ bị bào mòn, phôi bị chết chuyển sang màu đen (x100)
Hình 4.25. Trứng G. doloresi sau 4 ngày nuôitrong môi trường Ca(OH)2
4.3. NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC DO G. DOLORESI GÂY RA Ở LỢN
4.3.1. Bệnh tích đại thể do G. doloresi gây ra ở lợn
Quan sát bệnh tích đại thể ở các cơ quan mà ấu trùng giun di hành qua cũng như các vị trí giun trưởng thành ký sinh là một trong những biện pháp chẩn đoán bệnh do giun dạ dày G. doloresi gây ra ở lợn.
Chúng tôi tiến hành mổ khám 20 lợn bị nhiễm giun dạ dày G. doloresi ở cường độ từ 500-800 trứng/gam phân, không mắc các bệnh khác để kiểm tra bệnh tích đại thể (bảng 4.15).
Bảng 4.15. Tần suất bắt gặp các đặc điểm bệnh tích đại thể ở cơ quan tiêu hóa của lợn do nhiễm giun dạ dày gây ra
STT Bệnh tích đại thể ở dạ dày Số lợn mổ khám (con) Số lợn có bệnh tích (con) Tỷ lệ (%) 1 Phù niêm mạc dạ dày 20 19 95,00
2 Niêm mạc dạ dày bị viêm 20 100,00
3 Niêm mạc dạ dày tụ huyết 8 40,00
4 Xuất huyết niêm mạc dạ dày 6 30,00
5 Niêm mạc dạ dày bị loét có bờ cứng 17 85,00
6 Thủng niêm mạc dạ dày 20 100,00
Từ kết quả mổ khám cho thấy: lợn bị nhiễm G. doloresi niêm mạc dạ dày bị phù nề chiếm 95,00%. Niêm mạc dạ dày bị viêm và thủng chiếm 100%. Tụ huyết niêm mạc dạ dày chiếm 40,00%. Xuất huyết niêm mạc dạ dày chiếm 30,00%, niêm mạc dạ dày bị loét có bờ cứng chiếm 85,00%.
Từ kết quả trên chúng tôi nhận thấy, lợn bị nhiễm giun dạ dày G. doloresi
mặc dù tỷ lệ không cao. Nhưng bệnh tích do G. doloresi gây ra rất nặng ở dạ dày, ảnh hưởng đến quá trình tiêu hóa của lợn. Làm cho lợn sinh trưởng, phát triển kém và gây tổn thất lớn về kinh tế cho người chăn nuôi.
Theo Skrjabin and Petrov (1979), Phạm Văn Khuê và Phan Lục (1996) thì giun Gnathostoma cắm sâu vào thành dạ dày lợn, gây nên các vết loét sâu và hình thành các u lớn. Tại các u đó giun đục khoét tạo thành hang có bờ dày do tổ
chức xơ tăng sinh, giun phá hủy lớp niêm mạc dạ dày dẫn đến viêm cấp và mãn tính. Các tác giả Phan Địch Lân và cs. (2005), Phạm Sỹ Lăng và cs. (2011), Nguyễn Thị Kim Lan (2012) đều kết luận: giun trưởng thành cắm sâu vào niêm mạc dạ dày tạo nên những nốt loét sâu, có bờ cứng với những tổ chức xơ tăng sinh và tập trung nhiều bạch cầu ái toan. Niêm mạc dạ dày bị viêm, tụ huyết, xuất huyết. Giun chèn ép các tuyến tiết dịch ở dạ dày, ảnh hưởng đến chức năng hoạt động tiết dịch tiêu hóa của các tuyến. Các trường hợp bệnh nặng, lợn còn bị chảy máu dạ dày do giun gây ra.
Như vậy, kết quả mổ khám bệnh tích đại thể lợn mắc bệnh giun dạ dày G. doloresi của chúng tôi phù hợp với nhận xét của các tác giả nêu trên.
Hình 4.26. Niêm mạc dạ dày lợn bị tụ huyết, xuất huyết do G. doloresi gây ra
Hình 4.27. Thành dạ dày lợn bị đục khoét thành hang lớn có bờ cứng do giun G. doloresi gây ra
Hình 4.28. Niêm mạc dạ dày lợn bị phù và có nhiều vết rách do giun G. doloresi gây ra
4.3.2. Bệnh tích vi thể do G. doloresi gây ra ở lợn
Những tổn thương tế bào biểu mô ở thành dạ dày lợn là nơi ấu trùng
G. doloresi đi qua và cũng là những nơi giun trưởng thành ký sinh. Điều này có ý nghĩa rất quan trọng trong việc đánh giá tác hại của ấu trùng và giun trưởng thành đối với lợn, đây là yếu tố quan trọng phục vụ cho công tác chẩn đoán bệnh giun dạ dày của lợn qua phương pháp làm tiêu bản vi thể.
Chúng tôi chọn 9 lợn mổ khám để nghiên cứu tổn thương vi thể, là những lợn chỉ bị nhiễm riêng loài giun dạ dày G. doloresi ở cường độ từ 500-800 trứng/gam phân, không bị bệnh Truyền nhiễm, Nội khoa, Ngoại khoa, Sản khoa và nhiễm các loài giun, sán khác được xác định qua xét nghiệm phân. Mỗi mẫu bệnh phẩm của mỗi lợn được nghiên cứu trên 4 block, với tổng số 36 block được nghiên cứu (bảng 4.16).
Bảng 4.16. Tần suất bắt gặp các đặc điểm bệnh tích vi thể ở cơ quan tiêu hóa của lợn do nhiễm giun dạ dày gây ra STT Bệnh tích Tổng số block theo dõi Mức độ Tổng số block có bệnh tích + ++ +++ Số block Tỷ lệ (%) Số block Tỷ lệ (%) Số block Tỷ lệ (%) Số block Tỷ lệ (%) 1 Biểu mô niêm mạc dạ dày bị tổn thương 36 6 16,67 12 33,33 18 50,00 36 100,00 2 Tế bào biểu mô dạ dày bị phá hủy 36 2 5,56 14 38,88 20 55,56 36 100,00
3 Biểu mô dạ dày bị hoại tử 36 5 13,89 9 25,00 8 22,22 22 61,11
4 Thâm nhiễm tế bào viêm ở hạ niêm mạc 36 10 27,78 8 22,22 12 33,33 30 83,33 5 Hạ niêm mạc bị xung huyết và thấm nước phù 36 5 13,89 11 30,56 17 47,22 33 91,67 6 Thâm nhiễm bạch cầu ái toan ở hạ niêm mạc 36 9 25,00 11 30,56 14 38,89 34 94,44
Từ kết quả nghiên cứu cho thấy, lợn bị nhiễm G. doloresi thể hiện bệnh tích vi thể rõ nhất là: biểu mô thành dạ dày bị tổn thương, tế bào biểu mô dạ dày bị phá hủy, biểu mô dạ dày bị hoại tử, hạ niêm mạc bị xung huyết, thẫm nước phù, thâm nhiễm bạch cầu ái toan ở hạ niêm mạc. Trong đó biểu mô của niêm mạc dạ dày bị phá hủy với tỷ lệ 100%, mức độ biểu hiện tăng dần, lần lượt là: 16,67%; 33,33% và 50,00%. Tế bào biểu mô của niêm mạc dạ dày bị phá hủy nặng với tỷ lệ 100%, mức độ biểu hiện tăng dần, lần lượt là: 5,56%; 38,88% và 55,56%. Biểu mô của niêm mạc dạ dày bị hoại tử với tỷ lệ là 61,11%, mức độ tổn thương là 13,89%; 25,00% và 22,22%. Thâm nhiễm tế bào viêm ở hạ niêm mạc với tỷ lệ là 83,33%, mức độ biểu hiện là 27,78%; 22,22% và 33,33%. Hạ niêm mạc bị xung huyết và thẫm nước phù tỷ lệ là 91,67%, mức độ biểu hiện tăng dần 13,89%; 30,56% và 47,22%. Thâm nhiễm tế bào bạch cầu ái toan ở hạ niêm mạc là 94,44%, mức độ biểu hiện tăng dần 25,00%; 30,56% và 38,89%.
Nguyên nhân đưa đến các biểu hiện bệnh lý vi thể như vậy, theo chúng tôi có lẽ do cấu tạo phần đầu và phần thân của giun được phủ bởi một lớp gai cutin rất sắc nhọn, giúp cho giun cắm sâu vào niêm mạc thành dạ dày để đục khoét và hút máu tại đó. Từ những tác động cơ học gây tổn thương niêm mạc thành dạ dày, đã tạo điều kiện cho các vi khuẩn nội quan xâm nhập gây viêm dạ dày cấp và mãn tính, đồng thời tại chỗ viêm loét có hiện tượng đặc trưng là tập trung bạch cầu ái toan.
Chúng tôi cho rằng, mức độ tổn thương do G. doloresi gây ra ở dạ dày của lợn là khá trầm trọng, những tổn thương này gây cản trở tới khả năng co bóp thức ăn trong dạ dày từ đó ảnh hưởng đến quá trình tiêu hóa của lợn. Giun cắm sâu vào niêm mạc dạ dày gây nên những nốt viêm, loét sâu và tạo thành các hang lớn từ đó mở đường cho các vi khuẩn gây nhiễm kế phát, là một trong những nguyên nhân làm cho lợn bị gầy còm, chậm lớn.
Như vậy, từ kết quả nghiên cứu về những tổn thương vi thể do giun dạ dày G. doloresi gây ra chúng tôi khuyến cáo các nông hộ chăn nuôi lợn tại vùng nghiên cứu nên áp dụng các biện pháp phòng trị bệnh cho lợn như: định kỳ tẩy giun, sán cho lợn, vệ sinh chuồng trại thường xuyên, phân lợn thải ra cần được thu gom đem ủ và không nuôi lợn thả rông là biện pháp cần thiết nhằm hạn chế nhiễm ký sinh trùng nói chung, nhiễm giun dạ dày G. doloresi nói riêng, để bảo vệ sức khỏe cho đàn lợn là rất cần thiết.
Hình 4.29. Vết rách ở thành dạ dày do
G. doloresi tác động, nhuộm HE, x100
Hình 4.30. Thành dạ dày lành không bị giun tác động nhuộm HE, x50
Hình 4.31. Biểu mô dạ dày bị rách nát do giun G. doloresi tác động HE, x100
Hình 4.32. Hạ niêm mạc bị xung huyết và thẫm nước phù,
Hình 4.33. Biểu mô dạ dày bị tổn
thương nặng bắt màu hồng do
G. doloresi tác động, nhuộm HE, x100
Hình 4.34. Biểu mô dạ dày bị hoại tử bắt màu hồng do độc tố của
G. doloresi tiết ra, nhuộm HE, x100
Hình 4.35. Thâm nhiễm tế bào bạch cầu ái toan ở hạ niêm mạc bắt màu
tím, nhuộm HE, x400
Hình 4.36. Thâm nhiễm tế bào viêm ở hạ niêm mạc bắt màu tím
4.3.3. Xác định một số chỉ tiêu huyết học của lợn bị nhiễm Gnathostoma doloresi
Giun G. doloresi ký sinh và hút máu lợn, làm cho lợn bị thiếu máu, gây ảnh hưởng đến hệ thống tuần hoàn. Vì vậy, nghiên cứu tác hại của giun G. doloresi tới các chỉ tiêu sinh lý máu lợn là rất cần thiết. Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu chỉ tiêu huyết học của 9 lợn chỉ bị nhiễm riêng loài giun dạ dày G. doloresi ở cường độ từ 500-800 trứng/gam phân, không bị nhiễm các loài giun, sán khác được xác định qua xét nghiệm phân và các bệnh khác. Nhằm xác định các chỉ tiêu số lượng hồng cầu, bạch cầu, hàm lượng huyết sắc tố, tỷ lệ các loại bạch cầu ở trong máu của lợn bị nhiễm giun dạ dày G. doloresi và lợn không bị nhiễm giun dạ dày G. doloresi.
4.3.3.1. Số lượng hồng cầu, bạch cầu và hàm lượng huyết sắc tố giữa lợn không bị nhiễm giun G. doloresi và lô lợn bị nhiễm giun G. doloresi
Sự thay đổi về số lượng hồng cầu, bạch cầu và hàm lượng huyết sắc tố của lợn bị nhiễm giun G. doloresi và lợn không bị nhiễm giun G. doloresi được trình bày ở bảng 4.17.
Bảng 4.17. Số lượng hồng cầu, bạch cầu và hàm lượng huyết sắc tố giữa lợn không nhiễm giun G. doloresi và lợn bị nhiễm G. doloresi
Chỉ số máu Lợn không bị nhiễm G. doloresi (X ±mx) Lợn bị nhiễm G. doloresi (X ±mx) Mức ý nghĩa (p) *Số lợn nghiên cứu 9 9
Số lượng hồng cầu (triệu/mm3 máu) 5,22 ± 0,08 4,52 ± 0,12 P> 0,05 Số lượng bạch cầu (nghìn/mm3 máu) 20,04 ± 0,13 25,60 ± 0,10 P< 0,05 Hàm lượng huyết sắc tố (g%) 11,58 ± 0,11 9,94 ± 0,09 P> 0,05
Xét nghiệm máu của 9 lợn không bị nhiễm giun G. doloresi , số lượng hồng cầu là 5,22 ± 0,08 triệu/mm3 máu; số lượng bạch cầu là 20,04 ± 0,13 nghìn/mm3; hàm lượng huyết sắc tố là 11,58 ± 0,11g%. Trong khi đó xét nghiệm máu của 9 lợn bị nhiễm giun G. doloresi về số lượng hồng cầu là 4,52 ± 0,12 triệu/mm3 máu; số lượng bạch cầu là 25,60 ± 0,10 nghìn/mm3; hàm lượng huyết sắc tố là 9,94 ± 0,09g%.
Theo Nguyễn Xuân Tịnh và cs. (1996), Hoàng Toàn Thắng và Cao Văn (2006), số lượng hồng cầu của lợn lớn là 5,0 triệu/mm3 máu, số lượng bạch cầu là 20 nghìn/mm3 máu, hàm lượng huyết sắc tố ở lợn lớn là 11,5 g%.
Theo kết quả bảng 4.17, số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu và hàm lượng huyết sắc tố của lô lợn không bị nhiễm giun G. doloresi được chúng tôi xét nghiệm máu đều nằm trong giới hạn sinh lý bình thường của lợn. Nhưng số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu và hàm lượng huyết sắc tố của lô lợn nhiễm G. doloresi đã có sự thay đổi.
So sánh số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu và hàm lượng huyết sắc tố của lô lợn không nhiễm G. doloresi với lô lợnnhiễm G. doloresi cho thấy:
Số lượng hồng cầu: ở lô lợn không nhiễm G. doloresi trung bình là 5,22 triệu/mm3 máu; lợn ở lô nhiễm giun G. doloresi là 4,52 triệu/mm3 máu. Đã có sự thay đổi về số lượng hồng cầu giữa 2 lô, ở lô lợn nhiễm giun G. dolores số lượng hồng cầu thấp hơn so với lô lợn không nhiễm G. doloresi. Mặc dù đã có sự giảm đi về số lượng hồng cầu nhưng sự khác nhau này là rõ rệt (P>0,05).
Số lượng bạch cầu cũng có sự thay đổi giữa lô lợn không nhiễm G. doloresi và lô lợn nhiễm giun G. doloresi. Lô không nhiễm G. doloresi là 20,04 nghìn/mm3 máu; ở lô lợn bị nhiễm G. doloresi là 25,60 nghìn/mm3 máu. Như vậy, số lượng bạch cầu trung bình của lô lợn bị nhiễm G. doloresi có sự tăng lên so với lô lợn không nhiễm,