b. Đông lạnh cực nhanh (ultra rapid freezing)
3.2.2. Ảnh hưởng của môi trường nuôi thành thục đến khả năng tạo phô
vitro của tế bào trứng trâu
Kết quả của nghiên cứu này cho thấy việc bổ sung riêng lẻ FSH vào môi trường TCM 199 và Ham’s F-10 cho tỷ lệ phân chia; tạo phôi dâu, phôi nang cao hơn so với việc bổ sung riêng lẻ FCS vào hai môi trường này (Bảng 4).
Bảng 4: Khả năng tạo phôi in vitro của tế bào trứng trâu sau khi nuôi in vitro trong một số môi trường nuôi thành thục khác nhau
Môi trường nuôi thành thục Số tế bào trứng thụ tinh Tế bào trứng phân chia
Phôi dâu, phôi nang
Số tế bào trứng % (M ± SE) Số phôi dâu, phôi nang % (M ± SE) TCM 199 + FCS 123 51 41,46c ± 1,36 10 8,13c ± 1,55 TCM 199 + FSH 129 67 51,94c ± 1,47 11 8,53c ± 1,75 TCM 199 + FCS + FSH 160 104 65b ± 0,9 30 18,75b ± 0,93 Ham’s F10 + FCS 127 65 51,18c ± 1,34 11 8,66c ± 1,19 Ham’s F10 + FSH 138 94 68,12b ± 1,12 25 18,12b ± 1,41 Ham’s F10 + FCS + FSH 184 144 78,26a ± 1,79 54 29,35a ± 1,25
Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột có chữ cái khác nhau là sai khác có ý nghĩa (P<0,05)
Kết quả trên là phù hợp với báo cáo của Totey và cs. (1992; 1993); Palta và Chauhan (1998). Các tác giả này đã chỉ ra rằng FSH là yếu tố cần thiết cho sự giãn nở của tế bào nang và sự thành thục in vitro của tế bào trứng trâu bởi vì
FSH có ảnh hưởng đến sự giãn nở của tế bào nang bao xung quanh tế bào trứng, do đó nó có ảnh hưởng đến quá trình thụ tinh, tạo phôi in vitro.
Ali và Sirard (2002) cũng khẳng định rằng việc bổ sung FSH và E2 trong suốt quá trình nuôi thành thục in vitro tế bào sẽ làm tăng số lượng phôi dâu, phôi nang in vitro.
Hiệu quả của việc tạo phôi trâu in vitro được nâng cao khi bổ sung kết hợp cả FSH và FCS vào môi trường Ham’s F-10 và TCM 199. Tỷ lệ phân chia (tương ứng 78,26% và 65%); tạo phôi dâu, phôi nang (tương ứng 29,35%và 18,75%) trong môi trường nuôi có bổ sung kết hợp FSH và FCS cao hơn so với việc bổ sung riêng lẻ FSH, FCS (P<0,05; Bảng 4). Kết quả này là phù hợp với báo cáo của Chauhan và cs. (1997b); Chohan và Hunter (2003); Totey và cs. (1992). Các tác giả này cũng nhận thấy việc bổ sung riêng lẻ hormone hoặc huyết thanh vào môi trường TCM 199 sẽ không cải thiện được tỷ lệ thụ tinh (phân chia) in vitro.
Neglia và cs. (2001) cũng cho rằng việc sử dụng kết hợp FCS, LH và estradiol trong môi trường nuôi thành thục sẽ làm tăng tỷ lệ tế bào trứng trâu và bò thành thục in vitro. Trong môi trường Ham’s F-10 khi bổ sung luteinizing hormone (LH) sẽ cải thiện đáng kể tỷ lệ thành thục, còn việc thêm follicle stimulating hormone (FSH) và estradiol làm tăng tỷ lệ tạo phôi nang. Ngược lại trong TCM-199, LH không nâng cao tỷ lệ thành thục nhưng việc bổ sung FSH và oestradiol lại làm tăng tỷ lệ này.
Kết quả thể hiện ở bảng 4 cho thấy tỷ lệ phân chia; tạo phôi dâu, phôi nang của tế bào trứng trâu được thành thục trong môi trường Ham’s F-10 + FCS + FSH là cao hơn so với các môi trường còn lại (tương ứng là 78,26%; 29,35%; P<0,05). Kết quả của chúng tôi cho thấy việc sử dụng môi trường Ham’s F-10 trong quá trình nuôi thành thục in vitro tế bào trứng trâu mang lại hiệu quả tạo phôi trâu in vitro cao hơn so với môi trường TCM 199 ở cùng điều kiện. Kết quả
này là phù hợp với báo cáo của Abdoon và cs. (2001). Theo Abdoon và cs. (2001) tế bào trứng thành thục trong Ham’s F-10 sau thụ tinh có tỷ lệ phân chia và phát triển tốt hơn thành thục trong TCM - 199; MEM hoặc RPMI-1640.
Kết quả của mục 3.2.1 và 3.2.2 đã chỉ ra rằng tế bào trứng trâu được nuôi thành thục in vitro trong môi trường Ham’s F-10 có bổ sung kết hợp FCS và FSH cho tỷ lệ thành thục, phân chia và tạo phôi hiệu quả hơn các môi trường còn lại. Với kết quả đó chúng tôi sử dụng môi trường nuôi thành thục in vitro Ham’s F- 10 có bổ sung kết hợp FCS và FSH cho các thí nghiệm nuôi thành thục in vitro tế bào trứng trâu trong luận án này.