4. NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN
1.4.5. Quá trình giải đông và pha loãng
Việc giải đông tế bào trứng sau bảo quản lạnh được thực hiện ở nhiệt độ phòng hoặc trong bể ấm 37°C. Sau giải đông, các chất bảo vệ lạnh được loại bỏ khỏi tế bào, quá trình này được gọi là quá trình pha loãng. Đây cũng là giai đoạn rất quan trọng để ngăn chặn độc tố của các chất bảo vệ lạnh, tế bào trứng có thể tự sửa chữa những tổn thương và hồi phục. Hiện nay quá trình pha loãng thường gồm nhiều bước và nồng độ của các chất bảo vệ lạnh được giảm dần qua từng bước. Vai trò của chất bảo vệ lạnh không thấm màng trong quá trình pha loãng là làm cho chất bảo vệ lạnh thấm màng nhanh chóng được loại bỏ khỏi tế bào chất.
Trong quá trình giải đông tốc độ giải đông có một vai trò vô cùng quan trọng. Đó cũng là một yếu tố quan trọng để bảo quản lạnh thành công tế bào trứng của động vật có vú. Tốc độ giải đông tối ưu phụ thuộc vào loại tế bào và tốc độ đông lạnh trước đó. Các nghiên cứu ban đầu cho thấy tốc độ giải đông nhanh làm tăng tỷ lệ sống sau đông lạnh-giải đông của tế bào bởi vì tế bào ít có thời gian để tái kết tinh, thời gian tiếp xúc với chất bảo vệ lạnh ít hơn. Tuy nhiên
theo Whittingham và cs. (1972) thì vẫn có những trường hợp ngoại lệ cho quy tắc nêu trên. Họ đã chỉ ra rằng phôi được bảo quản lạnh bằng phương pháp đông lạnh chậm nếu giải đông từ từ sẽ cho tỷ lệ sống sau đông lanh-giải đông cao hơn, tỷ lệ này phụ thuộc vào tốc độ giải đông. Ngoài ra các tác giả này cũng kết luận rằng tỷ lệ sống của tế bào sau đông lạnh-giải đông bị giảm khi sử dụng tốc độ giải đông nhanh là còn do hiệu ứng thẩm thấu. Phương pháp phổ biến nhất giải đông tế bào trứng sau khi được thủy tinh hóa là phương pháp giải đông trực tiếp và nhanh chóng. Thông thường các tế bào trứng sẽ được giải đông ở 20o – 37oC. Sau khi giải đông, tế bào trứng phải được bù nước và chất bảo vệ lạnh sử dụng cho quá trình bảo quản lạnh phải được loại bỏ hết ra khỏi tế bào trứng. Tuy nhiên hiện nay vẫn chưa có một quy trình giải đông chuẩn nào cho quá trình bảo quản lạnh tế bào trứng.
1.5. PHƯƠNG PHÁP ĐÔNG LẠNH SỬ DỤNG TRONG QUÁ TRÌNH BẢO QUẢN LẠNH TẾ BÀO TRỨNG