4. NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN
1.4.4. Ảnh hưởng của thời gian và cách thức tiếp xúc với chất bảo vệ
đến tế bào trứng
Thời gian tiếp xúc với chất bảo vệ lạnh trong quá trình đông lạnh-giải đông là một yếu tố có ảnh hưởng không nhỏ tới hiệu quả của quá trình này. Theo Kasi (1996), một trong những yếu tố quan trọng đảm bảo cho sự thành công của quá trình thủy tinh hóa là phải lựa chọn được thời gian tiếp xúc tốt nhất với chất bảo vệ lạnh qua đó ngăn chặn được sự hình thành tinh thể đá và tránh cho tế bào trứng không bị những tổn thương lạnh trong quá trình này. Martin và cs. (2005); Karima và cs. (2010) đều cho rằng thời gian tiếp xúc của tế bào trứng với chất bảo vệ lạnh chỉ có giới hạn nhất định, nếu quá giới hạn này tế bào trứng sẽ bị chết sau khi tiếp xúc.
Trước khi đông lạnh, tế bào sẽ được tiếp xúc với dung dịch có chứa chất bảo vệ lạnh ở một nồng độ nhất định. Mỗi quy trình đông lạnh sẽ có một hình thức, cách thức tiếp xúc khác nhau. Việc tiếp xúc sẽ ảnh hưởng đến hiệu quả bảo quản lạnh tế bào, nếu tế bào bị tiếp xúc đột ngột với chất bảo vệ lạnh ở một nồng độ nào đó có thể gây shock thẩm thấu và thậm chí là gây chết tế bào. Có thể hạn chế những ảnh hưởng bất lợi này bằng cách: cho tế bào tiếp xúc với nồng độ cao chất bảo vệ lạnh trong thời gian rất ngắn thông qua việc cho chúng tiếp xúc với
dung dịch trước cân bằng có chứa nồng độ chất bảo vệ lạnh thấp hơn, hình thức tiếp xúc này gọi là tiếp xúc nhiều bước (Wood và cs., 1993; Papis và cs., 2000). Hiện nay trên thế giới thường sử dụng cách thức tiếp xúc nhiều bước trong quá trình bảo quản lạnh tế bào trứng. Nồng độ chất bảo vệ lạnh tăng dần theo các bước tiếp xúc cho đến nồng độ thích hợp cuối cùng đối với mẫu được bảo quản lạnh. Khi tế bào trứng được tiếp xúc nhiều bước với chất bảo vệ lạnh sẽ cho hiệu quả bảo quản lạnh tốt hơn là tiếp xúc 1 bước. Nguyên nhân là do trong quá trình tiếp xúc nhiều bước, các tế bào trứng sẽ được tiếp xúc với một dung dịch có nồng độ thấp trước khi chuyển sang dung dịch có nồng độ cao hơn, nhờ đó chúng sẽ tránh bị shock thẩm thấu đột ngột khi tiếp xúc với chất bảo vệ lạnh ở nồng độ cao.