4. NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN
1.2. MÔI TRƯỜNG NUÔI THÀNH THỤC IN VITRO TẾ BÀO
Môi trường nuôi thành thục in vitro có vai trò quan trọng và quyết định cho sự thành công của quy trình thụ tinh in vitro. Môi trường được sử dụng rộng rãi hiện nay trong nuôi thành thục in vitro tế bào trứng trâu là TCM 199 và Ham’s F-10. Vì môi trường nuôi thành thục được thiết kế để tế bào trứng có thể hoàn thiện quá trình thành thục của mình giống như trong cơ thể mẹ nên thường được bổ sung thêm huyết thanh, hormone và một số yếu tố kích thích sinh trưởng khác. Huyết thanh có vai trò cung cấp protein, các yếu tố chống oxy hóa và phát triển; không ảnh hưởng đến màng zona pellucida của tế bào trứng. Nồng độ bổ sung dao động từ 10% - 20%.
Để nâng cao hiệu quả nuôi thành thục in vitro tế bào trứng trâu các nhà nghiên cứu còn sử dụng kết hợp huyết thanh với hormone. Mặc dù tế bào trứng có thể thành thục mà không cần bổ sung hormone vào môi trường nuôi thành thục, nhưng việc có thêm gonadotropins và estradiol làm tăng tỷ lệ thành thục và thụ tinh. Trong môi trường Ham’s F-10 khi bổ sung luteinizing hormone (LH) cải thiện đáng kể tỷ lệ thành thục, còn việc thêm follicle stimulating hormone (FSH) và estradiol làm tăng tỷ lệ tạo phôi nang. Ngược lại trong TCM-199, LH không nâng cao tỷ lệ thành thục nhưng việc bổ sung FSH và oestradiol lại làm tăng tỷ lệ này. Theo Abdoon và cs. (2001) việc bổ sung FSH và huyết thanh ngựa chửa (eCG) vào môi trường nuôi thành thục có thể đạt tỷ lệ thành thục cao. Neglia và cs. (2001) cho rằng khi sử dụng kết hợp FCS, LH và estradiol trong môi trường nuôi thành thục làm tăng tỷ lệ trứng trâu và bò thành thục in vitro.
Ngoài việc bổ sung hormone và huyết thanh vào trong môi trường nuôi thành thục, một số nhà nghiên cứu còn nhận thấy rằng việc bổ sung yếu tố kích thích sinh trưởng ở một liều lượng nhất định làm tăng hiệu quả của quá trình nuôi thành thục in vitro. Một số yếu tố kích thích sinh trưởng như IGF-I; IGF-II, TGF-β cũng có thể được bổ sung vào môi trường nuôi thành thục. Theo Pawashe và cs., 1998 việc bổ sung IGF-I cùng với FSH thúc đẩy sự giảm phân, quá trình steroid và tổng hợp protein. Hơn nữa, việc bổ sung vào môi trường nuôi thành thục với nhân tố kích thích giống như insulin (IGF-II) làm tăng đáng kể tỷ lệ thành thục và phân chia so với những môi trường đối chứng khác (Chauhan và cs., 1998b). Ngoài ra, Chauhan và cs. (1999) báo cáo rằng việc bổ sung vào môi trường IVM với yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF) làm tăng đáng kể tỷ lệ thành thục và phân chia so với đối chứng.
Trong dịch nang trứng có chứa một số yếu tố kích thích sinh trưởng như IGF-I; IGF-II, TGF-β. Abdoon và cs. (2001) nhận thấy rằng việc thêm 10% dịch nang trứng (FF) hoặc dịch nang trứng trâu (buFF) thu từ những nang lớn vào môi trường nuôi thành thục với sự có mặt của eCG làm tăng đáng kể tỷ lệ cumulus giãn nở, phân chia và phát triển của phôi. Tuy nhiên khi nồng độ buFF cao (20- 60%) hoặc buFF thu từ những nang nhỏ làm giảm tỷ lệ thành thục và phân chia. Trong khi đó, Chauhan và cs. (1997b) cho rằng buFF có thể thay thế huyết thanh ở nồng độ cao hơn (20-40%).