thêm nước pha tiêm vừa đủ tới vạch, lắc đều.Mẫu thử được pha loãng 25 và 50 lần.
- Hút 1ml – 2ml – 3ml – 4ml – 5ml dung dịch nhôm chuẩn 2µg/ml vào lần lượt các bình nón ký hiệu số 4 – 5 – 6 – 7 – 8.
- Hút 1ml mẫu thử pha loãng 25 lần, 50 lần vào các bình nón ký hiệu số 2-3. - Thêm nước pha tiêm vừa đủ 5ml vào các bình nón ký hiệu từ 1 đến 8, lắc đều.
-Thêm 10ml dung dịch acetat buffer vào mỗi bình nón từ 1 đến 8, lắc đều. - Thêm 5ml dung dịch Stilbaso vào mỗi bình nón từ 1 đến 8, lắc đều. - Thêm 5ml nước pha tiêm vào mỗi bình nón từ 1 đến 8, lắc đều. - Giữ ở nhiệt độ phòng trong 20 phút.
- Đo quang phổ ở bước sóng 510 nm.
Kết quả
Dựng đường chuẩn: Căn cứ vào độ hấp thụ của dung dịch nhôm chlorid chuẩn và hàm lượng nhôm chlorid tương ứng để dựng đường chuẩn. Xử lý số liệu theo chương trình vẽ đồ thị trong Excel của máy tính, xây dựng được phương trình hồi quy tuyến tính thực nghiệm (phương trình đường chuẩn) y=ax+ b. Dựa theo phương trình tính ra hàm lượng nhôm trong mẫu vắcxin.
Tính kết quả : Công thức : Y = (y25.25/1 + y50.50/1)/2
Trong đó : Y : Hàm lượng nhôm có trong mẫu vắcxin (g/ml).
Y = ax + b
y : Hàm lượng nhôm (g).
y25 : Hàm lượng nhôm của mẫu thử pha loãng 25 lần.
y50 : Hàm lượng nhôm của mẫu thử pha loãng 50 lần.
x : Độ hấp phụ quang tương ứng với các hàm lượng nhôm. A, b : Hệ số của phương trình đường chuẩn.
25, 50 : Độ pha loãng của mẫu thử. 1 : Thể tích mẫu thử (ml).
Tiêu chuẩn chấp thuận : Hàm lượng nhôm có trong vắcxin EV71 trên nuôi cấy tế bào Vero ≤ 1250 g/ml
2.2.3.8. Phương pháp định lượng Formaldehyde tồn dư
Dụng cụ và trang thiết bị
- Máy quang phổ, cóng đo (GBC) - Ống nghiệm thuỷ tinh =18mm (Schott)
- Máy trộn (Stuard) - Pipet thuỷ tinh 5ml, 10ml (Kimax)
- Nồi inox (Zebra) - Bình định mức 50ml (Schott)
- Bếp ga (Paloma) - Cốc có mỏ loại 50ml (Schott)
- Pipet-aid (Thermo) - Ống nhựa 15ml (Falcon)
Vật liệu và hóa chất
- Nước pha tiêm (Vabiotech) - Dung dịch acetylaceton (Vabiotech) - Dung dịch formaldehyd chuẩn 0,04% (Vabiotech)
- Mẫu thử: Bán thành phẩm cuối cùng: 10ml; Vắcxin thành phẩm: 20 lọ
Nguyên lý: Định lượng formaldehyd bằng cách đo cường độ màu của 3,5 – diacetyl, 1,4 – dihydroluthidin ở bước sóng 415nm.
Tiến hành
Pha dung dịch formaldehyd chuẩn 0,0002%; 0,0004%; 0,0008%; 0,0012%