định lượng theo phương pháp Lowry.
- Pha dung dịch albumin chuẩn 25; 50; 100; 150 µg/ml - Pha loãng mẫu thử: Pha loãng mẫu tùy theo mức độ cô đặc
- Hút dung dịch albumin chuẩn 25; 50; 100; 150µg/ml và mẫu thử vào các ống.
- Thêm dung dịch TCA 10% vào mỗi ống nghiệm. Lắc đều.
- Đun cách thủy ở 80°C trong 15 phút. Làm nguội ở nhiệt độ phòng. Bao kín miệng các ống nghiệm bằng giấy parafilm. Ly tâm, hút bỏ nước nổi.
- Thêm TCA 5% vào mỗi ống nghiệm, lắc kỹ. Bao kín miệng các ống nghiệm bằng giấy parafilm. Ly tâm, hút bỏ nước nổi.
- Thêm dung dịch đồng alkalin vào mỗi ống nghiệm, lắc kỹ. - Để ở nhiệt độ phòng qua đêm.
- Thêm thuốc thử Folin vào mỗi ống nghiệm, lắc đều. - Đun cách thủy 37°C trong 30 phút, để nguội.
- Ly tâm, lấy nước nổi đo quang phổ bước sóng 750nm.
Kết quả
Dựng đường chuẩn: Căn cứ vào độ hấp thụ của dung dịch albumin chuẩn và hàm lượng albumin tương ứng để dựng phương trình đường chuẩn. Xử lý số liệu theo chương trình vẽ đồ thị trong Excel của máy tính, xây dựng được phương trình hồi quy tuyến tính thực nghiệm (phương trình đường chuẩn) y = ax + b. Dựa theo phương trình tính ra hàm lượng protein trong mẫu vắcxin.
Tính kết quả: Công thức: Y = n.y
Trong đó: Y: Hàm lượng protein có trong mẫu vắcxin (g/ml).
y = ax + b
y: Hàm lượng protein (g/ml)
x: Độ hấp phụ quang đo được tương ứng với mỗi nồng độ protein. a, b: Hệ số của phương trình đường chuẩn.
n: Độ pha loãng mẫu.
Tiêu chuẩn chấp thuận
- Bán thành phẩm cuối cùng, thành phẩm: Hàm lượng protein ≤ 20 mg/ml.
2.2.3.5. Phương pháp xác định pH
Dụng cụ và trang thiết bị
- Máy đo pH (Inolab) - Cốc thủy tinh (Schott)
- Pipet Aid (Thermo) - Pipet 10ml, 25ml (Corning)
- Tuýp nhựa 50 ml (Falcon)
Vật liệu và hóa chất
- Dung dịch pH chuẩn 10; 7; 4,01 (WTW) - Mẫu thử: Vắcxin
Tiến hành