- Tính ổn định di truyền Nhận dạng
3.2.8.QUY TRÌNH PHA BÁN THÀNH PHẨM CUỐI CÙNG
Cho đến nay chưa có vắcxin EV71 nào được cấp phép trên thế giới, do đó chưa có chuẩn hàm lượng kháng nguyên cho vắcxin EV71 dự tuyển. Việc thăm dò hàm lượng kháng nguyên EV71 đủ khả năng gây đáp ứng miễn dịch cần được tiến hành trong nghiên cứu này.
Hỗn dịch virút sau tinh chế được pha với đệm có chứa chất bảo quản (Thimerosal) để có hàm lượng kháng nguyên có trong vắcxin là 7,5µg/ liều và 15µg/ liều. Gây miễn dịch trên chuột nhắt trắng, tiêm 2 mũi cách nhau 14 ngày. Huyết thanh chuột sau gây miễn dịch được định lượng kháng thể trung hòa.
Kết quả bảng 3.24 cho thấy với liều tiêm 7,5µg và 15µg, 100% chuột có đáp ứng miễn dịch, hiệu giá kháng thể trung hòa sau liều 2 tăng cao. Liều vắcxin có hàm lượng kháng nguyên 7,5 µg thấp hơn liều 15µg vẫn đủ khả năng gây đáp ứng miễn dịch, vì vậy hàm lượng kháng nguyên 7,5 µg/ liều vắcxin được lựa chọn cho các nguyên cứu tiếp theo.
Bảng 3.24. Hiệu giá kháng thể trung hòa sau khi tiêm cho chuột các liều khác nhau Hàm lượng kháng nguyên (µg/ liều) Chuột số
Hiệu giá kháng thể trung hòa
Trước TN Sau liều 1 Sau liều 2
7,5 1 - 8 32 2 - - 16 3 - 16 64 4 - 8 32 5 - 16 128 15 6 - - 16 7 - 8 32 8 - 16 64 9 - 16 128 10 - 16 128
Đánh giá sự cần thiết của chất hấp phụ trong thành phần vắcxin, hai mẫu vắcxin có chất hấp phụ nhôm hàm lượng 300 µg và không có chất hấp phụ nhôm cùng pha với hàm lượng kháng nguyên 7,5 µg/ liều được so sánh tính sinh miễn dịch trên chuột nhắt trắng.
Mẫu có hấp phụ nhôm và không có hấp phụ nhôm đều gây đáp ứng miễn dịch 100% trên chuột. Hiệu giá kháng thể trung bình của mẫu có hấp phụ nhôm là 55,71 và của mẫu không hấp phụ nhôm là 36,75 (Bảng 3.25). Đáp ứng miễn dịch vắcxin có chất hấp phụ nhôm cao hơn vắcxin không có
chất hấp phụ nhôm, do đó chất hấp phụ nhôm với hàm lượng 300 µg sẽ là một thành phần trong công thức pha bán thành phẩm cuối cùng.
Bảng 3.25. Kết quả so sánh tính sinh miễn dịch của văcxin có và không có chất hấp phụ nhôm Chất hấp phụ +/ tổng số chuột được gây miễn dịch Hiệu giá kháng thể trung bình (GMT) - 5/5 36,75 Nhôm (300 µg/ml) 5/5 55,71