- Tính ổn định di truyền Nhận dạng
3.2.3.1. Kết quả nuôi cấy EV71 theo thời điểm thay môi trường duy trì tế bào.
gây nhiễm, đến thời điểm 36h sau gây nhiễm hiệu giá virút giảm do tế bào bị hủy hoại hoàn toàn không còn cơ chất cho sự nhân lên của virút. - Liều gây nhiễm 0.01 và 0.001: Lượng virút gây nhiễm thấp nên hiệu
giá virút thu được sau 24h sau gây nhiễm không cao, tuy nhiên hiệu giá virút tăng dần theo thời gian sau gây nhiễm và đạt đỉnh vào thời điểm 48h và 60h sau gây nhiễm.
- Kết quả trên cho thấy liều gây nhiễm 0.01 sau 48h gây nhiễm cho kết quả khả quan nhất. Vậy trong quy trình gây nhiễm EV71 vào tế bào Vero sử dụng liều gây nhiễm 0.01TCID50/tế bào là thích hợp nhất, hiệu giá virút đạt cao và không lãng phí chủng.
3.2.3. QUY TRÌNH NUÔI CẤY VÀ THU HOẠCH VIRÚT
Sau khi gây nhiễm, EV71 sẽ nhân lên trong tế bào Vero sau đó giải phóng ra nước nổi. Quá trình thu hoạch nước nổi nuôi cấy tế bào sẽ thu được virút và đây sẽ là nguyên liệu để tinh chế thành vắcxin.
Các thông số được khảo sát để xác định điều kiện nuôi cấy virút tối ưu bao gồm: số mẻ gặt thích hợp và loại chai nuôi cấy dùng trong nuôi cấy virút.
3.2.3.1. Kết quả nuôi cấy EV71 theo thời điểm thay môi trường duy trì tế bào. bào.
Nghiên cứu tiến hành gây nhiễm EV71 vào tế bào Vero với liều gây nhiễm 0.01TCID50/tế bào.
- Thu hoạch virút tại các thời điểm sau gây nhiễm, kiểm tra hiệu giá virút và thay môi trường nuôi cấy.
- Lấy mẫu kiểm tra hiệu giá virút tại các thời điểm sau gây nhiễm và không thay môi trường nuôi cấy.
Bảng 3.17. Kết quả nuôi cấy EV7 theo thời điểm thay môi trường và không thay môi trường nuôi cấy.
Thời gian gặt (PI)
Thay môi trường nuôi cấy Không thay môi trường nuôi cấy Thể tích (ml) Hiệu giá (TCID50/ ml) Tổng hiệu giá (TCID50/ml) Thể tích (ml) Hiệu giá (TCID50/ ml) Tổng hiệu giá (TCID50/ml) 24h 40 105.5 1,975x108 - 105.75 2,249x108 36h 40 105.25 - 106.25 48h 40 105.75 40 106.75 60h 40 105.25 -
Theo kết quả bảng 3.17 hiệu giá virút đạt đỉnh 106.75
TCID50/ml vào khoảng thời gian 48h sau nuôi cấy ở mẫu không thay môi trường nuôi cấy. Ở mẫu thay môi trường tại các thời thu hoạch virút, hiệu giá virút thấp khoảng 105 TCID50/ml tại tất cả các thời điểm gặt virút. Tổng hiệu giá virút của mẫu không thay môi trường cao hơn mẫu thay môi trường do đó quy trình nuôi cấy EV71 chỉ thu hoạch một lần duy nhất sau nuôi cấy để đảm bảo thu được hiệu giá virút cao hơn và tiết kiệm chi phí môi trường nuôi cấy.