- Tính ổn định di truyền Nhận dạng
3.2.7.2.Siêu ly tâm
Trong quy trình sản xuất vắcxin EV71 trên nuôi cấy tế bào Vero, phương pháp tinh chế virút được sử dụng là siêu ly tâm. Phương pháp này tận dụng được các lợi thế sẵn có của cơ sở sản xuất về hệ thống máy siêu ly tâm và các kinh nghiệm đã áp dụng thành công trong sản xuất các vắcxin virút khác như vắcxin viêm gan B và vắcxin viêm não Nhật Bản. Đồng thời, đây cũng là một phương pháp tinh chế tương đối rẻ tiền hy vọng sẽ làm giảm giá thành của sản phẩm vắcxin trong tương lai.
Phương pháp siêu ly tâm tinh chế vi rút được nghiên cứu là siêu ly tâm phân vùng trong gradient đường sucrose trên hệ thống rotor góc cố định. Phân đoạn có chứa kháng nguyên vi rút được xác định bằng thử nghiệm ELISA phát hiện kháng nguyên EV71. Độ tinh khiết của bán thành phẩm sau tinh chế được đánh giá bằng thử nghiệm điện di trên gel SDS-PAGE, đo hàm lượng protein ở bước sóng 280 nm.
Theo kết quả hình 3.10 sau siêu ly tâm: Các phân đoạn 1,2,3,4 và cặn có hiệu giá virút cao và được tách khỏi đỉnh các phân đoạn 6,7,8,9 là các phân đoạn có lẫn protein tạp. Hình ảnh chạy điện di trên gel SDS-PAGE (Hình 3.11) cho thấy mức độ tinh sạch của kháng nguyên vi rút thu được.
Hình 3.10. Kết quả siêu ly tâm tinh chế EV71
Hình 3.11. Hình ảnh điện di trên gel SDS-PAGE. 1- Chuẩn trọng lượng phân tử; 2- Mẫu trước siêu ly tâm; 3,4- Mẫu sau siêu ly tâm
Cùng với các kết quả xác định hàm lượng ADN tế bào tồn dư và hình ảnh vi rút sau tinh chế dưới kính hiển vi điện tử (Hình 3.12) đã khẳng định siêu ly tâm trong gradient đường sucrose cho kháng nguyên virút có độ tinh khiết cao thích hợp để pha vắcxin.
Hình 3.12. Hình ảnh hiển vi điện tử các hạt EV71 sau tinh chế
(Thực hiện tại Phòng Hiển vi điện tử, VVSDT)