đó virut được bất hoạt bằng formalin với nồng độ cuối cùng 1:2000 ở nhiệt độ 36,5°C ± 0,5°C trong 7 ngày. ADN tồn dư trong hỗn dịch virut được xử lý bằng DNase ở nhiệt độ 36,5°C ± 0,5°C trong 1 giờ.Siêu ly tâm hỗn dịch virut trong đệm sucrose.
- Vắcxin được hấp phụ với Aluminum hydroxide ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ và 4°C trong 24 giờ.
2.2.2. Kiểm tra chất lượng trong quá trình sản xuất Thử nghiệm vô khuẩn: Xem phần 2.1.2.1 Thử nghiệm vô khuẩn: Xem phần 2.1.2.1
Thử nghiệm chuẩn độ hiệu giá virút TCID50: Xem phần 2.1.4.2
2.2.2.1. Thử nghiệm ELISA định lượng EV71
Dụng cụ và trang thiết bị
- Máy rửa phiến ELISA (Bio-rad) - Pipet Aid (Thermo)
- Máy đọc phiến ELISA (Bio-rad) - Pipet 10ml, 25ml, 50ml (Corning)
- Tủ ấm (Memmert) - Đầu típ 200μl; 1000μl (Corning)
- Tủ lạnh (Sanyo) - Giá gắn bản (Nunc)
- Pipet đa kênh (Thermo) - Phiến gắn bẳn 8 giếng (Nunc)
- Pipetman (Gilson) - Chai thủy tinh các loại (Schott)
Vật liệu và hóa chất:
- Dung dịch đệm gắn bản - Chứng âm; Chứng dương; Mẫu thử
- Dung dịch rửa - Dung dịch ngừng phản ứng
- Dung dịch pha cộng hợp - Kháng thể chuột kháng EV71
- Dung dịch đệm cơ chất; OPD - Cộng hợp IgG thỏ kháng EV71-HRP
Nguyên lý
Các giếng của phiến được gắn với kháng thể chuột tinh khiết kháng kháng nguyên EV71. Kháng nguyên EV71 trong mẫu thử sau khi được thêm vào giếng sẽ gắn với kháng thể được gắn trên phiến tạo ra phức hợp kháng nguyên – kháng thể trên bề mặt giếng. Sau khi rửa phiến các kháng nguyên virut không gắn sẽ bị loại trừ. Thêm cộng hợp kháng thể thỏ tinh khiết kháng kháng nguyên EV71gắn peroxidaza vào giếng. Cộng hợp này sẽ gắn với kháng nguyên EV71 có trong phức hợp kháng nguyên – kháng thể trên. Phần cộng hợp không gắn sẽ được loại bỏ sau khi rửa phiến. Thêm dung dịch cơ chất vào các giếng. Màu vàng đậm hay nhạt sẽ xuất hiện trong các giếng có kháng nguyên EV71 dương tính tỷ lệ thuận với hàm lượng kháng nguyên có trong mẫu thử.