- Thử nghiệm vô khuẩn
2.1.2.3. Thửnghiệm kiểm tra các virut ngoại lai trên tế bào
Dụng cụ và trang thiết bị
- Kính hiển vi đảo pha (Olympus) - Pipet 5ml, 10ml (Corning)
- Tủ ấm (Memmert) - Chai nuôi tế bào 25cm2 (Corning)
- Pipet Aid (Thermo)
Vật liệu và hóa chất
- Tế bào VERO, MRC5, RK - Huyết thanh bào thai bê (Gibco)
- Môi trường MEM (Gibco) - Dung dịch PBS (-) (Vabiotech)
Tiến hành
Theo dõi tế bào chứng:
- Các chai tế bào chứng được theo dõi hàng ngày dưới kính hiển đảo pha và ghi kết quả vào phiếu theo dõi tế bào chứng. Sau 14 ngày, nước nổi từ các chai tế bào chứng này được hộn lại và tiến hành thử nghiệm phát hiện các tác nhân ngoại lai trên các dòng tế bào khác nhau.
Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: Môi trường MEM chứa 2% FBS
Chuẩn bị tế bào: Mỗi loại tế bào (VERO, MRC5, RK) được nuôi cấy trong các chai nuôi cấy tế bào 25cm2, mỗi mẫu thử dùng 4 chai, mẫu chứng âm là 2 chai.
Thử nghiệm phát hiện các tác nhân ngoại lai trên các dòng tế bào
* Mẫu thử: Loại bỏ hết môi trường nuôi cấy trong các chai tế bào. Rửa tế
bào bằng PBS(-). Cấy vào mỗi chai tế bào 3ml hộn nước nổi nuôi cấy tế bào chứng. Cho thêm 9ml môi trường MEM 2% FBS vào mỗi chai.
* Mẫu chứng âm: Loại bỏ hết môi trường nuôi cấy trong các chai tế bào. Rửa tế bào bằng PBS(-). Cho vào mỗi chai 12ml môi trường nuôi cấy MEM 2% FBS.
* Nuôi cấy: Các chai tế bào được nuôi cấy ở nhiệt độ 36O
C ± 1OC trong 14 ngày, hàng ngày theo dõi tế bào và ghi kết quả vào Nhật ký kiểm định.
Tiêu chuẩn chấp thuận
- Các chai tế bào chứng phát triển bình thường, tế bào mọc kín một lớp, không có CPE.
- Không có CPE trong tất cả các chai tế bào (VERO, MRC5, RK) gây nhiễm với nước nổi nuôi cấy tế bào.