- Tính ổn định di truyền Nhận dạng
3.2.5. QUY TRÌNH BẤT HOẠT VIRÚT
Bất hoạt là một bước quan trọng trong quy trình sản xuất vắcxin EV71, quyết định đến tính an toàn của sản phẩm vắcxin khi sử dụng cho người. Nhiều phương pháp bất hoạt khác nhau được sử dụng như bất hoạt bằng hóa chất, bất hoạt bằng nhiệt hay bất hoạt bằng tia cực tím. Nghiên cứu này đề cập đến phương pháp bất hoạt bằng hóa chất sử dụng Formalin nhằm tìm ra các thông số về thời gian và nhiệt độ bất hoạt. Đánh giá hiệu quả bất hoạt, tiến hành thử nghiệm kiểm tra khả năng bất hoạt trên tế bào và thử nghiệm ELISA.
Bảng 3.20. Kết quả bất hoạt formalin 1:2000 ở nhiệt độ 2°C-8°C và nhiệt độ 36,5 °C ± 0,5°C
Thời gian bất hoạt (Ngày)
Hiệu quả bất hoạt
2°C-8°C 36,5°C ± 0,5°C 1 Không đạt Không đạt 2 Không đạt Không đạt 3 Không đạt Không đạt 4 Không đạt Đạt 5 Không đạt Đạt 6 Không đạt Đạt 7 Không đạt Đạt 8 Không đạt Đạt 10 Không đạt Đạt 12 Không đạt Đạt 14 Không đạt Đạt
Bảng 3.21. Hiệu giá kháng nguyên trước và sau 14 ngày bất hoạt ở nhiệt độ 2°C-8°C và nhiệt độ 36,5 ± 0,5°C
Chỉ số Hiệu giá kháng nguyên EL.U
2°C-8°C 36,5°C ± 0,5°C
Trước bất hoạt 1,952 1,952
Sau bất hoạt 14 ngày 1,446 1,284
Số lần giảm 1.35 1.52
Theo kết quả bảng 3.20 nhiệt độ ảnh hưởng đến hiệu quả bất hoạt, ở nhiệt độ bất hoạt 36,5°C ± 0,5°C chỉ sau 4 ngày virút đã được bất hoạt (TCID50 = 0). Trong khi ở nhiệt độ 2°C-8°C sau 14 ngày hỗn dịch virút vẫn chưa bất hoạt được hoàn toàn. Hiệu giá kháng nguyên virút giảm sau 14 ngày bất hoạt cả ở nhiệt độ 2°C-8°C và 36,5°C ± 0,5°C là gần tương đương (Bảng 3.21). Để bất hoạt virút ở nhiệt độ 2°C-8°C phải có các nghiên cứu về thời gian dài hơn 14 ngày, một số các nguyên cứu bất hoạt EV71 tại nhiệt độ 2°C- 8°C [10][52] cho thấy phải mất 35 đến 42 ngày để bất hoạt EV71. Tuy nhiên trong quy trình sản xuất, thời gian bất hoạt là rất quan trọng, thời gian bất hoạt quá dài làm ảnh hưởng đến tốc độ sản xuất. Bất hoạt tại nhiệt độ 36,5°C ± 0,5°C rút ngắn được thời gian bất hoạt, hiệu giá kháng nguyên virút giảm không đáng kể so với bất hoạt ở 2°C-8°C. Với các số liệu về bất hoạt như trên, virút đã bất hoạt hoàn toàn sau 4 ngày với nồng độ formalin 1:2000 ở nhiệt độ bất hoạt 36,5°C ± 0,5°C. Vậy thời gian bất hoạt 7 ngày là an toàn, thời gian bất hoạt kéo dài gấp 2 lần thời gian bất hoạt hiệu quả virút (4 ngày). Kể từ ngày thứ 7 sau bất hoạt lấy mẫu kiểm tra hiệu quả bất hoạt. Các loạt thử nghiệm đều đạt hiệu quả bất hoạt vào ngày thứ 7 với nồng độ formalin 1:2000 ở nhiệt độ bất hoạt 36,5°C ± 0,5°C.