tinh
- Lắc kỹ các lọ vắcxin, trộn vào ống Falcon 50ml đã đánh dấu tên loạt vắcxin. - Chuẩn lại pH của máy đo bằng các dung dịch pH chuẩn
- Nhúng điện cực vào các cốc đựng dung dịch mẫu thử. Đọc các thông số về pH hiện lên trên máy đo.
- Trước mỗi lần chuyển điện cực sang một dung dịch mới, phải rửa kỹ điện cực bằng nước cất pha tiêm và lau khô.
Kết quả
Tiêu chuẩn chấp thuận:pH của vắcxin EV71 trên nuôi cấy tế bào Vero phải nằm trong khoảng 6,5 - 8,0.
2.2.3.6. Phương pháp định lượng Thimerosal
Dụng cụ và trang thiết bị
- Máy đo quang, cóng đo (GBC) - Bình gạn loại 100ml (Schott)
- Máy ly tâm (Eppendorf) - Cốc thủy tinh 100ml; 500ml (Schott)
- Máy trộn (Stuard) - Dụng cụ chia mẫu tự động (Gilson)
- Máy hút chân không (Millipore) - Ống đong loại 500ml (Schott) - Tuýp nhựa 50 ml (Falcon) - Buret thủy tinh 50ml (Schott)
Vật liệu và hóa chất
- Thimerosal chuẩn (Vabiotech) - Amomiac 9N (Vabiotech) -Dithizon 0,02% (Vabiotech) - Acid sulfuric 10% (Vabiotech) - Cacbon tetraclorid (Merck) - Nước pha tiêm (Vabiotech)
Tiến hành
- Nguyên lý: Dựa trên cơ sở thimerosal phản ứng với dithizon tạo thành hợp chất có cực đại hấp thụ ở bước sóng 480nm. Định lượng thimerosal bằng cách đo độ hấp phụ chất tạo thành ở bước sóng này.
- Lắc kỹ các lọ vắcxin, trộn vào ống Falcon đã đánh dấu tên loạt vắcxin, lắc đều.
- Hút 0,5ml dung dịch thimerosal chuẩn 50µg/ml, 100µg/ml, 150µg/ml lần lượt vào mỗi 2 bình nón 4 - 5, 6 - 7, 8 - 9. Hút 0,5ml mẫu thử vào mỗi bình nón 2 - 3.
- Thêm nước pha tiêm vừa đủ 5ml vào mỗi bình nón từ 1 đến 9, lắc đều.
- Thêm 5ml dung dịch acid sulfuric 10% vào mỗi bình nón từ 1 đến 9, lắc đều.
- Dùng buret thêm 10ml dung dịch dithizon 0,002% vào mỗi bình nón từ 1 đến 9.
- Đậy nắp, lắc trong 2 phút. Để yên cho tách thành 2 lớp, hút bỏ lớp nước nổi. - Thêm 10ml nước pha tiêm vào mỗi bình, lắc mạnh. Để yên cho tách thành 2 lớp, hút bỏ lớp nước nổi.
- Thêm 10ml dung dịch amoniac 60% vào mỗi bình, lắc mạnh. Để yên cho tách thành 2 lớp, hút bỏ lớp nước nổi.
- Làm bước này 3 lần.
- Màu của cacbon tetraclorid chuyển từ xanh lá cây sang màu vàng cam.
- Thêm 10ml nước pha tiêm vào mỗi bình, lắc mạnh. Để yên cho tách thành 2 lớp, hút bỏ lớp nước nổi.
- Chuyển sang bình gạn, gạn lấy lớp cacbon tetraclorid. - Lọc qua giấy lọc, đo quang phổ bước sóng 480nm.
Kết quả
Dựng đường chuẩn: Căn cứ vào độ hấp thụ của dung dịch thimerosal chuẩn và hàm lượng thimerosal tương ứng để dựng phương trình đường chuẩn. Xử lý số liệu theo chương trình vẽ đồ thị trong Excel của máy tính, xây dựng được phương trình hồi quy tuyến tính thực nghiệm (phương trình đường chuẩn) y = ax + b. Dựa theo phương trình tính ra hàm lượng thimerosal có trong mẫu thử.
Tính kết quả: Công thức: Y = y. 100/1000000 = y. 0,0001
Trong đó: Y: Hàm lượng thimerosal có trong mẫu vắcxin (g %).
y = ax + b
y: Hàm lượng thimerosal (g/ml).
x: Độ hấp thụ quang đo được tương ứng với từng hàm lượng
thimerosal.
a, b: Hệ số của phương trình đường chuẩn.
100: Đổi ra g %.
1000000: Hệ số qui đổi từ g ra g.
Tiêu chuẩn chấp thuận: Hàm lượng thimerosal có trong vắcxin ≤ 0,012%.
2.2.3.7. Phương pháp định lượng nhôm.
Dụng cụ và trang thiết bị
- Máy đo quang, cóng đo (GBC) - Ống nghiệm thủy tinh 18mm (Schott) - Bình nón loại 100ml (Schott) - Cốc thủy tinh 100ml; 500ml (Schott) - Máy hút chân không (Millipore) - Đầu típ 1ml (Corning)
- Pipet aid (Thermo) - Bình định mức 25ml, 250ml (Schott)
- Pipetman (Gilson) - Pipet 5 ml (Corning)
- Dụng cụ chia mẫu tự động (Gilson)
Vật liệu và hóa chất
- Nhôm chuẩn 0,1% (Merck) - Acid nitric đậm đặc (BDH)
-Dung dịch Stilbazo (Dojindo) - Dung dịch đệm acetat (Vabiotech)
Tiến hành
- Nguyên lý: Hàm lượng nhôm có trong vắcxin được xác định bằng cách đo màu của hợp chất tạo ra từ phản ứng của ion Al3+ với thuốc thử Stilbazo