STT Phƣơng pháp sàng lọc Số dịng cDNA dƣơng tính * JRC0332 JRC0528 1 SD/-Leu/-Ura/-His ~ 3,1 x 106 ~ 8,8 x 105 2 SD/-Leu/-Ura/-His + 3-AT 10 mM 148 201 3 SD/-Leu/-Ura/-His + 3-AT 30 mM 35 48 4 Hoạt tính β-galactosidase 23 21 5 PCR 18 19 6 Giải trình tự gen 3 5 *
Mỗi khuẩn lạc nấm men đại diện cho một dịng cDNA dương tính.
Kết quả sàng lọc thƣ viện cDNA cho thấy: với đoạn DNA đích JRC0332, 18 dịng cDNA dƣơng tính đã đƣợc sàng lọc từ 3,1 x 106
DNA đích JRC0528, 19 dịng cDNA dƣơng tính đã đƣợc sàng lọc từ 8,8 x 105
thể biến nạp. Tất cả các dịng cDNA dƣơng tính này đƣợc giải trình tự nucleotide và so sánh với các trình tự gen của lúa đã công bố trên GenBank. Kết quả (Bảng 3.2) cho thấy có nhiều protein khác nhau có khả năng liên kết với hai đoạn DNA đích JRC0332 và JRC0528. Đặc biệt, trong số 18 dịng cDNA dƣơng tính mã hố cho các protein liên kết với đoạn DNA đích JRC0332 có 3 dịng mã hố cho protein NLI-IF (mã số NM_001050330.1); đối với thí nghiệm sử dụng đoạn DNA đích JRC0528, kết quả thu đƣợc cũng có 5 dịng cDNA mã hoá cho protein NLI-IF. Cả 8 dịng cDNA mã hóa NLI-IF thu đƣợc đều là những đoạn cDNA hồn chỉnh, có chiều dài ~1850 bp, trong đó vùng ORF dài 1320 bp mã hóa cho chuỗi polypeptide gồm 439 acid amin, vùng khơng mã hóa đầu 5’ dài 311 bp, vùng khơng mã hóa đầu 3’ dài 219 bp. Kết quả thu đƣợc chứng tỏ chúng tôi đã bƣớc đầu phân lập thành cơng gen mã hóa protein có khả năng liên kết đặc hiệu với hai đoạn DNA đích.