PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Thiết bị
Sắc kí lớp mỏng sử dụng loại tráng sẵn silicagel 60F245 (Merck), hiện màu bằng đèn UV và hơi iot. Chất hấp phụ silicagel 230-400 (Merck) được sử dụng trong sắc kí cột. Điểm chảy được xác đ nh trên kính hiển vi Boetius. Phổ tử ngoại UV được ghi trên máy Aglilent UV-VIS. Phổ hồng ngoại IR được ghi trên máy Bruker 270-30, dạng viên nén KBr. Phổ khối lượng va chạm electron EI-MS đo trên máy MS-Engine- 5989-HP. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-,
13
C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC và COSY đo trên máy Bruker Avance-500 NMR (Viện Hĩa học –Viện Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam).
2.2. Nguyên liệu thực vật
Mẫu hạt Na xiêm (Annona muricata
L.) được thu hái ở Đồng Tháp vào tháng 8/2009 và được TS Trần Huy Thái (Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh vật-Viện Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam) xác đ nh tên khoa học và mẫu được lưu giữ tại Khoa Sinh học - Trường Đại học Vinh.
2.3. Phương pháp phân lập các hợp chất các hợp chất
Lấy 1,0 kg hạt Na xiêm (sau khi sấy ở 400C), xay nhỏ được chiết với metanol ở nhiệt độ phịng trong thời gian 1 tuần. D ch chiết được cất thu hồi dung mơi, thu được
60g cao. Sau đĩ, chiết lần lượt với etyl axetat và n-butanol, cất thu hồi dung mơi thu được 26g và 15g cao tương ứng.
Cao etyl axetat được phân tách trên cột silicagel với hệ dung mơi rửa giải: CHCl3:CH3OH (40:1, 30:1, 20:1, 10:1, 6:1, 4:1, 2:1) thu được 6 phân đoạn chính. Phân đoạn 1 sắc kí lại và kết tinh lại nhiều lần thu được chất 2 (2175 mg). Phân đoạn 2 sắc kí lại và kết tinh lại nhiều lần thu được chất 1 (167 mg) và 3 (202 mg)tương ứng. Hợp chất 1: Chất rắn màu trắng, đ.n.c 125-1260C; IRmaxKBrcm-1: 3391 và 1631cm-1 EI-MS: m/z [M]+: 594 (6), 435 (100); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) (ppm) và 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) (ppm): xem bảng 1. Hợp chất 2: Tinh thể hình lập phương khơng màu, đ.n.c 162-1630 C; UV maxMeOH nm: 212; IRmaxKBrcm-1: 2937,9; 1690,6; 1487,3. Phổ EI-MS: m/z [M]+ 302. Phổ 1H- NMR (500 MHz, CDCl3) (ppm): 4,80 (1H, br s, H-17b) và 4,73 (1H, br s, H- 17a), 2,63 (1H, br s, H-13), 1,24 (3H, s, H- 18), 0,95 (3H, s, H-20). Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) (ppm): xem bảng 2. Hợp chất 3: Tinh thể hình kim, đ.n.c. 135-136oC; IR maxKBr cm-1: 3400, 3025, 1410, 1250, 690 và 820; EI-MS m/z: [M]+ 414. Phổ 1 H-NMR (500MHz, CDCl3) (ppm): 5,31 (1H, dd, J= 5,0; 2,0 Hz, H-6), 3,51 (1H, m, H-3), 1,01 (3H, s, H-19), 0,92 (3H, d, J=6,2Hz, H-21), 0,84 (3H, d, J=6,6 Hz, H-29), 0,83 (3H, d, J = 6,5 Hz , H-26), 0,81 (3H, d, J= 6,6 Hz, H-27), 0,68 (3H, s, H-18). Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3) (ppm): 140,8 (C-5), 121,7 (C-6), 71,8 (C- 3), 56,8 (C-14), 56,1 (C-17), 50,2 (C-9), 45,9 (C-24), 42,3 (C-4, C-13), 39,8 (C-12), 37,3 (C-1), 36,5 (C-10), 36,2 (C- 20), 33,9 (C-22); 31,9 (C-7); 31,7 (C-8); 29,7 (C-2);
29,2 (C-25); 28,3 (C-16); 26,1 (C-23); 24,3 (C-15); 23,1 (C-28); 21,1 (C-11); 19,8 (C- 19); 19,4 (C-27); 19,1 (C-26); 18,8 (C-21); 11,9 (C-18, C-29).